胞浆表达绿色荧光蛋白的伯氏疟原虫的构建和筛选

发布时间：2023-03-05 11:01

　　目的:为了追踪疟原虫发育及侵染的情况,构建及筛选胞浆稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的伯氏疟原虫。方法:构建含有伯氏疟原虫230p基因和GFP基因的重组质粒pL0035-GFP,质粒线性化后通过电转染转入野生型伯氏疟原虫;基于双交换同源重组原理,利用乙胺嘧啶筛选获得在230p基因处插入GFP的重组疟原虫;有限稀释法筛选表达GFP的单克隆重组伯氏疟原虫;PCR鉴定重组疟原虫基因型,荧光显微镜和流式细胞术检测GFP表达情况。结果:PCR及DNA测序结果表明GFP基因成功整合到伯氏疟原虫基因230p;荧光显微镜可观察到重组疟原虫胞浆呈绿色荧光,流式细胞术检测到绿色荧光信号。结论:成功构建胞浆表达绿色荧光蛋白的伯氏疟原虫。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株、质粒和疟原虫株
    1.2 主要材料和试剂
    1.3 质粒pL0035-GFP的构建
        1.3.1 获取目的片段
        1.3.2 载体和目的片段连接
    1.4 疟原虫转染
    1.5 重组疟原虫筛选与单克隆筛选
    1.6 表达GFP的重组疟原虫的红内期成像与流式检测
2 结果
    2.1 构建胞浆表达GFP伯氏疟原虫的策略
    2.2 重组质粒pL0035-GFP的构建
    2.3 伯氏疟原虫转染后重组子的鉴定
    2.4 转染重组质粒pL0035-GFP的疟原虫在红内期表达GFP
3 讨论



本文编号：3756069