STZ和食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型肝脏转录组和蛋白质组差异分析
发布时间：2023-03-18 14:40
合理的动物模型对2型糖尿病(Type 2 Diabetes mellitus,T2DM)的研究至关重要。链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)对胰腺组织β细胞具有特异毒性作用,因此被广泛应用于糖尿病动物模型的制作。高脂高糖食物联合低剂量STZ诱导T2DM模型具有造模时间短,成模率高和造模成本低等特点,是目前应用最广泛的造模方法,但是人类T2DM的发生与STZ没有直接的关系,目前最理想的T2DM模型制作方法仍为高脂高糖自然食物诱导。本研究旨在通过构建高脂高糖食物联合低剂量STZ诱导和单纯高脂高糖食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型,分别进行模型猪肝脏组织转录水平和蛋白水平的差异分析,并完成差异候选基因在细胞表达水平和小鼠T2DM模型中的表达验证,为T2DM动物模型的合理应用提供科学的理论依据。主要试验结果如下:1、STZ和食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型构建选取22头20-22 kg雌性巴马小型猪用于T2DM模型制作。随机分为4组:第一组(n=4)用基础饲料饲喂10个月(Control,Ctrl);第二组(n=10)高脂高糖饲料饲喂10个月(DM1H...
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文中关键缩略词中英文对照
第一章 综述
1 2型糖尿病简介
2 T2DM实验动物模型的研究进展
2.1 自发型T2DM动物模型的应用
2.2 诱导型T2DM动物模型的应用
3 STZ与T2DM动物模型
3.1 STZ的结构特点
3.2 STZ给药途径和应用剂量的研究
3.3 STZ的分解和代谢
3.4 STZ在动物模型中的实际应用
3.5 高脂高糖饮食联合低剂量STZ诱导T2DM动物模型的优点
4 肝脏与T2DM的关系
4.1 肝脏中的糖代谢
4.2 肝脏与胰岛素抵抗
5 转录组学和蛋白质组学技术在糖尿病研究领域的应用
5.1 转录组学在糖尿病研究中的应用
5.2 蛋白质组学在糖尿病研究中的应用
6 小型猪疾病模型的应用和发展
7 研究目的和意义
第二章 STZ和食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型构建及成模特点比较分析
1 材料
1.1 试验动物
1.2 动物日粮
1.3 试验耗材和试剂
1.4 试验仪器
2 试验方法
2.1 试验动物的饲养
2.2 血液生理生化指标的测定
2.3 静脉注射葡萄糖耐实验(IVGTT)
2.4 胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的计算
2.5 病理切片制作
2.6 巴马小型猪T2DM模型标准
2.7 数据处理
3 结果
3.1 体重测定
3.2 血清生理生化指标测定结果
3.3 静脉葡萄糖耐试验结果
3.4 HOMA-IR计算
3.5 病理试验结果
4 讨论
5 本章小结
第三章 STZ和食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型肝脏转录组比较分析
1 材料
1.1 动物样品
1.2 试验试剂
1.3 试验仪器
2 试验方法
2.1 转录组建库测序方法
2.2 转录组数据分析方法
2.3 转录差异基因表达验证
2.4 qRT-PCR数据分析
3 结果
3.1 RNA提取和检测
3.2 样品测序数据统计
3.3 测序片段与参考基因组比对结果
3.4 样品RNA-Seq相关性分析
3.5 差异表达基因统计
3.6 GO分析差异基因功能
3.7 KEGG分析差异基因功能
3.8 差异基因表达验证
4 讨论
5 本章小结
第四章 STZ和食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型肝脏蛋白质组学比较分析
1 材料
1.1 动物样品
1.2 试验试剂
1.3 试验仪器
2 方法
2.1 iTRAQ标记定量蛋白质组学技术流程
2.2 蛋白质组学数据分析方法
2.3 转录组学和蛋白质组学联合分析方法
2.4 Western Blot方法
3 结果
3.1 iTRAQ标记试验结果
3.2 差异蛋白统计结果
3.3 差异蛋白聚类热图
3.4 差异蛋白GO分析
3.5 差异蛋白KEGG分析
3.6 差异蛋白网络互作(PPI)分析
3.7 转录组学和蛋白质组学联合分析结果
3.8 Western Blot验证RPL15基因的表达
4 讨论
5 本章小结
第五章 候选基因RPL15的克隆和细胞水平的功能验证
1 材料
1.1 试验动物样品
1.2 试验细胞株及质粒
1.3 试验试剂
1.4 试验仪器
2 试验方法
2.1 肝脏样品RNA的提取和cDNA的合成
2.2 RPL15基因引物设计与合成
2.3 RPL15基因克隆
2.4 RPL15基因序列分析
2.5 RPL15基因过表达载体构建
2.6 RPL15基因干扰载体构建
2.7 HEPG2细胞复苏与培养
2.8 HEPG2细胞转染
2.9 qRT-PCR检测RPL15互作基因的表达
2.10 qRT-PCR检测相关癌基因和抑癌基因的表达
2.11 数据处理和分析
3 结果
3.1 广西巴马小型猪RPL15基因克隆
3.2 广西巴马小型猪RPL15基因序列分析
3.3 RPL15基因真核表达载体酶切验证
3.4 HEPG2肝脏细胞RPL15基因过表达结果
3.5 HEPG2肝脏细胞RPL15基因表达干扰结果
3.6 RPL15互作基因的表达验证
3.7 HEPG2肝脏细胞中癌基因和抑癌基因的表达
4 讨论
5 本章小结
第六章 候选基因RPL15在小鼠T2DM模型中的表达分析
1 材料
1.1 试验动物
1.2 动物日粮
1.3 试验耗材和试剂
1.4 试验仪器
2 试验方法
2.1 试验动物的饲养
2.2 空腹血糖检测
2.3 腹腔注射葡萄糖耐试验(IGTT)
2.4 qRT-PCR检测小鼠RPL15基因组织表达
2.5 Western Blot验证小鼠肝脏RPL15基因的表达
2.6 数据分析
3 结果
3.1 体重测定
3.2 空腹血糖(FBG)测定结果
3.3 腹腔注射葡萄糖耐试验(IGTT)结果
3.4 小鼠RPL15基因组织表达分析
3.5 Western Blot验证RPL15蛋白在肝脏的表达
4 讨论
5 本章小结
全文总结与创新
1 总结
2 本研究的创新点
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表论文情况
本文编号：3763322
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文中关键缩略词中英文对照
第一章 综述
1 2型糖尿病简介
2 T2DM实验动物模型的研究进展
2.1 自发型T2DM动物模型的应用
2.2 诱导型T2DM动物模型的应用
3 STZ与T2DM动物模型
3.1 STZ的结构特点
3.2 STZ给药途径和应用剂量的研究
3.3 STZ的分解和代谢
3.4 STZ在动物模型中的实际应用
3.5 高脂高糖饮食联合低剂量STZ诱导T2DM动物模型的优点
4 肝脏与T2DM的关系
4.1 肝脏中的糖代谢
4.2 肝脏与胰岛素抵抗
5 转录组学和蛋白质组学技术在糖尿病研究领域的应用
5.1 转录组学在糖尿病研究中的应用
5.2 蛋白质组学在糖尿病研究中的应用
6 小型猪疾病模型的应用和发展
7 研究目的和意义
第二章 STZ和食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型构建及成模特点比较分析
1 材料
1.1 试验动物
1.2 动物日粮
1.3 试验耗材和试剂
1.4 试验仪器
2 试验方法
2.1 试验动物的饲养
2.2 血液生理生化指标的测定
2.3 静脉注射葡萄糖耐实验(IVGTT)
2.4 胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的计算
2.5 病理切片制作
2.6 巴马小型猪T2DM模型标准
2.7 数据处理
3 结果
3.1 体重测定
3.2 血清生理生化指标测定结果
3.3 静脉葡萄糖耐试验结果
3.4 HOMA-IR计算
3.5 病理试验结果
4 讨论
5 本章小结
第三章 STZ和食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型肝脏转录组比较分析
1 材料
1.1 动物样品
1.2 试验试剂
1.3 试验仪器
2 试验方法
2.1 转录组建库测序方法
2.2 转录组数据分析方法
2.3 转录差异基因表达验证
2.4 qRT-PCR数据分析
3 结果
3.1 RNA提取和检测
3.2 样品测序数据统计
3.3 测序片段与参考基因组比对结果
3.4 样品RNA-Seq相关性分析
3.5 差异表达基因统计
3.6 GO分析差异基因功能
3.7 KEGG分析差异基因功能
3.8 差异基因表达验证
4 讨论
5 本章小结
第四章 STZ和食物诱导的广西巴马小型猪T2DM模型肝脏蛋白质组学比较分析
1 材料
1.1 动物样品
1.2 试验试剂
1.3 试验仪器
2 方法
2.1 iTRAQ标记定量蛋白质组学技术流程
2.2 蛋白质组学数据分析方法
2.3 转录组学和蛋白质组学联合分析方法
2.4 Western Blot方法
3 结果
3.1 iTRAQ标记试验结果
3.2 差异蛋白统计结果
3.3 差异蛋白聚类热图
3.4 差异蛋白GO分析
3.5 差异蛋白KEGG分析
3.6 差异蛋白网络互作(PPI)分析
3.7 转录组学和蛋白质组学联合分析结果
3.8 Western Blot验证RPL15基因的表达
4 讨论
5 本章小结
第五章 候选基因RPL15的克隆和细胞水平的功能验证
1 材料
1.1 试验动物样品
1.2 试验细胞株及质粒
1.3 试验试剂
1.4 试验仪器
2 试验方法
2.1 肝脏样品RNA的提取和cDNA的合成
2.2 RPL15基因引物设计与合成
2.3 RPL15基因克隆
2.4 RPL15基因序列分析
2.5 RPL15基因过表达载体构建
2.6 RPL15基因干扰载体构建
2.7 HEPG2细胞复苏与培养
2.8 HEPG2细胞转染
2.9 qRT-PCR检测RPL15互作基因的表达
2.10 qRT-PCR检测相关癌基因和抑癌基因的表达
2.11 数据处理和分析
3 结果
3.1 广西巴马小型猪RPL15基因克隆
3.2 广西巴马小型猪RPL15基因序列分析
3.3 RPL15基因真核表达载体酶切验证
3.4 HEPG2肝脏细胞RPL15基因过表达结果
3.5 HEPG2肝脏细胞RPL15基因表达干扰结果
3.6 RPL15互作基因的表达验证
3.7 HEPG2肝脏细胞中癌基因和抑癌基因的表达
4 讨论
5 本章小结
第六章 候选基因RPL15在小鼠T2DM模型中的表达分析
1 材料
1.1 试验动物
1.2 动物日粮
1.3 试验耗材和试剂
1.4 试验仪器
2 试验方法
2.1 试验动物的饲养
2.2 空腹血糖检测
2.3 腹腔注射葡萄糖耐试验(IGTT)
2.4 qRT-PCR检测小鼠RPL15基因组织表达
2.5 Western Blot验证小鼠肝脏RPL15基因的表达
2.6 数据分析
3 结果
3.1 体重测定
3.2 空腹血糖(FBG)测定结果
3.3 腹腔注射葡萄糖耐试验(IGTT)结果
3.4 小鼠RPL15基因组织表达分析
3.5 Western Blot验证RPL15蛋白在肝脏的表达
4 讨论
5 本章小结
全文总结与创新
1 总结
2 本研究的创新点
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表论文情况
本文编号：3763322
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3763322.html
