大肠杆菌脂多糖影响HeLa细胞胞内ATP能量的传感检测及代谢机制研究
发布时间：2023-04-12 05:36
食源性致病菌大部分为革兰氏阴性菌,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为革兰氏阴性菌细胞壁的主要毒力因子,其毒性作用主要表现在能够使机体产生强烈的炎症反应,而炎症反应的发生能够造成能量代谢的异常。三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)作为机体内通用的“能量货币”,其胞内浓度的变化能够反映出能量代谢方式的改变。本文基于金纳米十字(Au nanocrosses,AuNCs)-石墨烯量子点(graphene quantum dots,GQDs)纳米组装体(AuNCs-GQDs)探究大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS对HeLa细胞胞内ATP的影响,进一步通过测定大肠杆菌LPS对HeLa细胞能量代谢相关生理指标的影响,以及利用代谢组学研究大肠杆菌LPS对能量代谢相关代谢通路的影响,研究了大肠杆菌LPS对HeLa细胞能量代谢的影响机制。基于AuNCs-GQDs组装体可视化研究大肠杆菌LPS对HeLa细胞胞内ATP的影响。采用种子生长法合成AuNCs,并对其进行表面修饰。将修饰有ATP适配体的GQDs与修饰有互补链DNA的...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词索引
第一章 绪论
1.1 LPS简介
1.1.1 LPS的理化性质
1.1.2 LPS的毒性作用
1.2 能量代谢
1.2.1 能量代谢通路概述
1.2.2 肿瘤细胞能量代谢方式
1.2.3 肿瘤微环境对能量代谢的影响
1.3 ATP生理作用及其检测方法
1.3.1 ATP的生理作用
1.3.2 ATP的传统检测方法
1.3.3 新型纳米材料ATP荧光生物传感器
1.4 细胞代谢组学
1.4.1 代谢组学简介
1.4.2 代谢组学手段研究肿瘤细胞能量代谢
1.5 立题背景与意义
1.6 主要研究内容
第二章 构建AuNCs-GQDs可视化探究大肠杆菌LPS对HeLa细胞ATP影响
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 材料与试剂
2.2.2 设备和仪器
2.3 实验方法
2.3.1 AuNCs-GQDs组装体构建
2.3.2 ATP的定量检测与特异性评价
2.3.3 评价AuNCs-GQDs组装体细胞毒性
2.3.4 细胞成像
2.4 结果与讨论
2.4.1 AuNCs-GQDs组装体的传感原理
2.4.2 GQDs激发波长的选择与组装条件的优化
2.4.3 AuNCs-GQDs组装体的表征
2.4.4 AuNCs-GQDs组装体对胞外ATP的检测
2.4.5 AuNCs-GQDs组装体细胞毒性评价
2.4.6 AuNCs-GQDs组装体对胞内ATP的响应
2.4.7 大肠杆菌LPS对HeLa细胞胞内ATP的影响
2.5 本章小结
第三章 大肠杆菌LPS对HeLa细胞能量代谢相关生理指标影响研究
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 材料与试剂
3.2.2 设备和仪器
3.3 实验方法
3.3.1 细胞培养
3.3.2 炎症因子的测定
3.3.3 胞内ATP含量的测定
3.3.4 总NO含量与NO合酶活力测定
3.3.5 线粒体活性氧与线粒体膜电位测定
3.3.6 酶活性测定
3.4 结果与讨论
3.4.1 大肠杆菌LPS对HeLa细胞炎症因子及ATP含量的影响
3.4.2 大肠杆菌LPS对HeLa细胞NO含量的影响
3.4.3 大肠杆菌LPS对线粒体功能的影响
3.4.4 大肠杆菌LPS对能量代谢相关酶活性的影响
3.5 本章小结
第四章 代谢组学探究大肠杆菌LPS对HeLa细胞能量代谢影响
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 设备和仪器
4.3 实验方法
4.3.1 实验分组
4.3.2 细胞培养
4.3.3 细胞淬灭及胞内物质提取
4.3.4 衍生化
4.3.5 GC-MS检测
4.3.6 代谢数据预处理
4.3.7 代谢数据处理与多元统计分析
4.4 结果与讨论
4.4.1 能量代谢靶向代谢物的鉴定
4.4.2 靶向代谢物的多元统计分析
4.4.3 热图分析
4.4.4 糖酵解、TCA循环、磷酸戊糖途径及氨基酸相关代谢物分析
4.5 本章小结
主要结论与展望
主要结论
展望
致谢
参考文献
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文
本文编号：3790539
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词索引
第一章 绪论
1.1 LPS简介
1.1.1 LPS的理化性质
1.1.2 LPS的毒性作用
1.2 能量代谢
1.2.1 能量代谢通路概述
1.2.2 肿瘤细胞能量代谢方式
1.2.3 肿瘤微环境对能量代谢的影响
1.3 ATP生理作用及其检测方法
1.3.1 ATP的生理作用
1.3.2 ATP的传统检测方法
1.3.3 新型纳米材料ATP荧光生物传感器
1.4 细胞代谢组学
1.4.1 代谢组学简介
1.4.2 代谢组学手段研究肿瘤细胞能量代谢
1.5 立题背景与意义
1.6 主要研究内容
第二章 构建AuNCs-GQDs可视化探究大肠杆菌LPS对HeLa细胞ATP影响
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 材料与试剂
2.2.2 设备和仪器
2.3 实验方法
2.3.1 AuNCs-GQDs组装体构建
2.3.2 ATP的定量检测与特异性评价
2.3.3 评价AuNCs-GQDs组装体细胞毒性
2.3.4 细胞成像
2.4 结果与讨论
2.4.1 AuNCs-GQDs组装体的传感原理
2.4.2 GQDs激发波长的选择与组装条件的优化
2.4.3 AuNCs-GQDs组装体的表征
2.4.4 AuNCs-GQDs组装体对胞外ATP的检测
2.4.5 AuNCs-GQDs组装体细胞毒性评价
2.4.6 AuNCs-GQDs组装体对胞内ATP的响应
2.4.7 大肠杆菌LPS对HeLa细胞胞内ATP的影响
2.5 本章小结
第三章 大肠杆菌LPS对HeLa细胞能量代谢相关生理指标影响研究
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 材料与试剂
3.2.2 设备和仪器
3.3 实验方法
3.3.1 细胞培养
3.3.2 炎症因子的测定
3.3.3 胞内ATP含量的测定
3.3.4 总NO含量与NO合酶活力测定
3.3.5 线粒体活性氧与线粒体膜电位测定
3.3.6 酶活性测定
3.4 结果与讨论
3.4.1 大肠杆菌LPS对HeLa细胞炎症因子及ATP含量的影响
3.4.2 大肠杆菌LPS对HeLa细胞NO含量的影响
3.4.3 大肠杆菌LPS对线粒体功能的影响
3.4.4 大肠杆菌LPS对能量代谢相关酶活性的影响
3.5 本章小结
第四章 代谢组学探究大肠杆菌LPS对HeLa细胞能量代谢影响
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 设备和仪器
4.3 实验方法
4.3.1 实验分组
4.3.2 细胞培养
4.3.3 细胞淬灭及胞内物质提取
4.3.4 衍生化
4.3.5 GC-MS检测
4.3.6 代谢数据预处理
4.3.7 代谢数据处理与多元统计分析
4.4 结果与讨论
4.4.1 能量代谢靶向代谢物的鉴定
4.4.2 靶向代谢物的多元统计分析
4.4.3 热图分析
4.4.4 糖酵解、TCA循环、磷酸戊糖途径及氨基酸相关代谢物分析
4.5 本章小结
主要结论与展望
主要结论
展望
致谢
参考文献
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文
本文编号：3790539
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3790539.html
