Unc13基因胰岛β细胞条件性敲除小鼠模型的构建和鉴定

发布时间：2023-04-21 01:33

　　目的构建Cre重组酶系统调控的Unc13基因胰岛β细胞条件性敲除小鼠,为Unc13基因在胰岛素分泌中扮演的角色和作用机制的体内实验研究提供更特异的动物模型。方法运用CRISPR/Cas9技术构建Unc13^flox/flox转基因小鼠,将其与胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶(Ins2-cre)工具鼠进行杂交,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序等方法对其子代小鼠的基因型进行鉴定,并对该基因敲除(knock out,KO)小鼠及其同窝野生(wild type,WT)小鼠的体质量、糖耐量、胰岛素分泌水平进行测定。结果成功构建胰岛β细胞特异性Unc13基因条件性敲除小鼠(以下简称为Unc13 KO鼠)。进一步研究显示Unc13 KO鼠与WT鼠相比,体质量无明显变化,但糖耐量受损,胰岛素第一时相分泌下降。结论成功构建了Unc13基因胰岛β细胞条件敲除小鼠动物模型,为探讨Unc13基因在糖尿病发生、发展中的作用提供研究平台。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 采用CRISPR/Cas9技术构建Flox小鼠
        1.2.1 构建打靶载体
        1.2.2 显微操作与F0代鉴定
        1.2.3 繁育纯合突变小鼠
    1.3 Unc13基因胰岛β细胞条件敲除小鼠构建
    1.4 小鼠基因型的鉴定
        1.4.1 小鼠尾部基因组DNA提取
        1.4.2 小鼠基因组DNA的PCR扩增反应
        1.4.3 琼脂糖凝胶电泳及结果分析
    1.5 小鼠腹腔葡萄糖耐量实验(intra-peritoneal glu-cose tolerance test,IPGTT)及血清胰岛素浓度测定
    1.6 统计学方法
2 结果
    2.1 Flox小鼠构建策略
    2.2 F1代杂合Flox小鼠构建及基因型鉴定
    2.3 胰岛β细胞条件性敲除鼠构建及基因型鉴定
    2.4 Unc13 KO小鼠葡萄糖代谢能力下降
    2.5 Unc13 KO小鼠胰岛素分泌功能受损
3 讨论



本文编号：3795560