丹皮酚通过调节NF-κB信号通路改善干眼动物模型中的炎症反应

发布时间：2023-05-13 19:55

　　目的:探究丹皮酚对干眼引起的眼表损伤的疗效及其相关作用机制。方法:本实验通过皮下注射东莨胆碱联合干燥环境建立干眼动物模型。将实验小鼠分为正常对照组、干眼组、溶剂对照组以及丹皮酚溶液组四个组别(每组老鼠5-7只),前期分别设置1%、5%、10%三个不同浓度梯度的丹皮酚溶液组别,造模5天后,使用酚红棉线法测量基础泪液分泌量;俄勒冈绿染料(Oregon green dextran,OGD)荧光染色检测角膜上皮缺损程度;过碘酸-希夫(Periodic acid-Schiff,PAS)染色检测小鼠结膜杯状细胞数量;免疫荧光染色检测角膜上皮屏障功能相关指标(基质金属蛋白酶-3、9:MMP-3、MMP-9);免疫荧光染色和western blot检测角膜和结膜上皮凋亡标志物(Caspase-3、Caspase-8、TUNEL);免疫组织化学染色检测结膜中CD4阳性T细胞的浸润;qRT-PCR和Elisa方法检测小鼠结膜中炎症因子的表达水平。最后使用western blot检测小鼠结膜中活化的NF-κB蛋白表达变化。结果:丹皮酚溶液滴眼5天可以增加小鼠的泪液分泌量、减少结膜杯状细胞的丢失并改善角膜上皮...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 干眼
        1.1.1 干眼的定义与流行病学
        1.1.2 干眼涉及的泪膜功能单位的组织解剖
        1.1.3 干眼的病理生理机制
        1.1.4 干眼的动物模型
        1.1.5 干眼的抗炎治疗
    1.2 丹皮酚
        1.2.1 丹皮酚概述
        1.2.2 丹皮酚的药理作用及其相关机制
    1.3 干眼中的炎症信号通路
        1.3.1 眼表炎症相关信号通路
        1.3.2 NF-κB信号通路
        1.3.3 NF-κB信号通路与细胞凋亡
第二章 实验材料
    2.1 实验动物
    2.2 实验药物
    2.3 实验试剂
        2.3.1 主要试剂配制
        2.3.2 主要实验试剂及耗材
    2.4 实验仪器及设备
第三章 实验方法
    3.1 小鼠干眼动物模型建立及分组
    3.2 基础泪液分泌量测定
    3.3 OGD荧光染色
    3.4 石蜡切片及相关染色
        3.4.1 石蜡标本制备
        3.4.2 石蜡切片
        3.4.3 PAS染色
        3.4.4 原位末端转移酶标记技术(TUNEL染色)
    3.5 冰冻切片及免疫荧光染色
        3.5.1 冰冻切片
        3.5.2 免疫荧光染色
        3.5.3 CD4免疫组织化学染色
    3.6 实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)
        3.6.1 小鼠角膜总RNA提取
        3.6.2 RNA浓度和纯度测定(分光光度计)
        3.6.3 逆转录
        3.6.4 Real-time PCR
        3.6.5 数据分析
    3.7 炎症因子蛋白质水平检测(ELISA法)
    3.8 Westert blot免疫印迹分析
        3.8.1 蛋白提取及定量
        3.8.2 Western blot免疫印迹分析
    3.9 统计分析
第四章 实验结果
    4.1 基础泪液分泌量测定实验结果
    4.2 眼表OGD染色结果
    4.3 小鼠结膜杯状细胞数量的变化
    4.4 角膜上皮屏障功能检测结果
    4.5 角结膜组织中Caspase表达情况
    4.6 角结膜组织中TUNEL染色情况
    4.7 结膜CD4染色情况
    4.8 结膜组织中炎症因子的表达情况
    4.9 丹皮酚的抗炎机制探究
第五章 讨论
第六章 结论
附录 中英文对照表
参考文献
致谢
在学期间主要科研成果



本文编号：3816412