严重急性呼吸综合征冠状病毒2假病毒的制备及验证

发布时间：2023-09-13 22:34

　　目的建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)假病毒(SARS-CoV-2 pps)的制备方法。方法设计、合成序列优化的SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因,构建表达质粒,转染293T细胞,用免疫荧光检测S蛋白的表达;将该质粒与基于慢病毒基因骨架的含增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的假病毒包装质粒共转染293T细胞,收集细胞培养上清,感染Vero E6和Huh7细胞,观察细胞内EGFP的表达;将制备的SARS-CoV-2 pps感染Vero E6细胞,检测膜融合抑制剂氯喹和盐酸阿比朵尔、SARS-CoV-2 S1蛋白单克隆抗体及新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清对假病毒感染性的影响。结果构建的SARS-CoV-2 S质粒转染的293T细胞可与S1蛋白单克隆抗体及新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清反应。SARS-CoV-2 S质粒与HIV假病毒包装质粒共转染293T细胞的上清加入Vero E6细胞和Huh7细胞36 h和72 h后可分别观察到细胞内表达的EGFP,EGFP阳性的Huh7细胞数量明显多于Vero E6细胞。2种膜融合抑制剂、1株人源S1单克隆抗体及2份新型冠状病...

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 质粒载体、细胞、试剂
    1.2 SARS-CoV-2 S基因设计、合成与表达质粒构建
    1.3 SARS-CoV-2 S基因表达产物鉴定
    1.4 假病毒制备与感染性检测
    1.5 检测膜融合抑制剂和S抗体对SARS-CoV-2 pps感染的影响
    1.6 统计学处理
2 结 果
    2.1 SARS-CoV-2 S蛋白在293T细胞中的表达鉴定
    2.2 SARS-CoV-2 pps感染靶细胞的鉴定
    2.3 2种膜融合抑制剂对SARS-CoV-2 pps感染的影响
    2.4 S1单克隆抗体及COVID-19患者恢复期血清对SARS-CoV-2 pps感染的影响
3 讨 论



本文编号：3846043