鲍曼不动杆菌DsbC蛋白的原核表达及纯化

发布时间：2023-09-14 05:48

　　目的克隆鲍曼不动杆菌二硫键形成蛋白C(DsbC)基因,制备重组DsbC蛋白,为研究其活性奠定基础。方法通过NCBI获得DsbC蛋白序列,分析其生物学性质。采用PCR方法扩增无信号肽DsbC基因,并将其连接到表达质粒pET28a,构建重组质粒pET28a-DsbC,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后用IPTG诱导DsbC蛋白的表达,采用镍离子亲和层析法纯化目的蛋白。结果 DsbC具有一个信号肽,由2个相同的DsbC蛋白分子构成二聚体。PCR扩增去掉信号肽的DsbC基因大小为636bp,构建的重组质粒pET28a-DsbC经PCR测序验证正确。重组质粒转化DE3后经IPTG诱导,表达分子质量单位为26.1×10³的DsbC蛋白,经镍柱纯化得到单一电泳条带的重组蛋白。结论使用基因工程的方法表达并经镍柱层析得到高纯度的鲍曼不动杆菌DsbC蛋白,为进一步研究其活性奠定了基础。

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 菌株和质粒
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 鲍曼不动杆菌DsbC蛋白的生物信息学分析
        2.2 DsbC基因的PCR扩增
        2.3 重组质粒的构建
        2.4 重组DsbC蛋白的表达与纯化
结果
    1 DsbC蛋白的生物信息学分析
    2重组质粒pET28a-DsbC的构建及鉴定
    3 重组DsbC蛋白在大肠埃希菌中的表达与纯化
讨论



本文编号：3846675