钩端螺旋体分子特性分析研究

发布时间：2023-10-27 19:51

　　钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体引起的一种人兽共患病,为世界上流行最广泛的人兽共患传染病之一,其严重病例可发展至多器官衰竭、甚至死亡。目前,对钩端螺旋体的分类方法主要包括传统的血清学方法和基因分子分型方法。经典的血清学分类法在过去几十年应用较为广泛,但使用血清均为多克隆抗体,在不同钩端螺旋体血清群或型之间存在一定的交叉反应。随着生物技术的发展,各种分子分型方法被应用于各国钩端螺旋体病的流行病学研究。本研究应用16S rRNA、多位点序列分析(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对中国食品药品检定研究院钩端螺旋体专业实验室保存的73株国内菌株和63株国外菌株进行了分子分型。研究结果表明,应用16S rRNA基因序列分析技术对各种血清群菌株进行基因种分析,共鉴定出85株致病性钩端螺旋体,分别属于8个不同的钩端螺旋体基因种属；应用聚合酶链式反应(PCR)对钩端螺旋体的7个管家基因扩增、测序,进行多位点序列分析(MLST),得出了各致病性菌株的基因型(STs),并发现了47种新的MLST基因型,其中32种来自中国,表明中国钩端螺旋体分子流行趋势与其他国家有所不同；利用限制性内切酶Not ...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 钩端螺旋体简介
        1.1.2 钩端螺旋体形态及活性
        1.1.3 钩端螺旋体基因组特点
        1.1.4 钩端螺旋体流行病学
    1.2 国内外研究现状与发展趋势
        1.2.1 血清学分类
        1.2.2 基因分类
    1.3 本研究拟解决的关键问题及创新点、理论意义及应用价值
第二章 钩端螺旋体基因种鉴定
    2.1 材料与设备
        2.1.1 实验菌株
        2.1.2 设备
        2.1.3 耗材
        2.1.4 试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 钩端螺旋体的培养
        2.2.2 钩端螺旋体DNA提取
        2.2.3 16S rRNA和SecY基因扩增
        2.2.4 通用引物扩增16S rRNA基因测序
    2.3 实验结果
        2.3.1 电泳结果
        2.3.2 通用引物扩增的16S rRNA基因产物的测序分析结果
    2.4 讨论
第三章 多位点序列分析
    3.1 材料与设备
        3.1.1 菌株
        3.1.2 仪器设备
        3.1.3 耗材
        3.1.4 试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 PCR反应体系
        3.2.2 反应条件
        3.2.3 电泳
    3.3 MLST实验结果
    3.4 讨论
第四章 脉冲场凝胶电泳分析
    4.1 材料与设备
        4.1.1 菌株
        4.1.2 仪器与试剂
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 培养基及其它试剂配制
    4.2 PFGE实验方法
        4.2.1 菌体收集与胶块制备
        4.2.2 细菌裂解
        4.2.3 基因组总DNA的酶切
        4.2.4 脉冲场电泳和染色
        4.2.5 聚类分析
    4.3 PFGE分析结果
        4.3.1 PFGE电泳结果图
        4.3.2 脉冲场凝胶电泳分型结果聚类分析
    4.4 讨论
第五章 结论
致谢
参考文献
作者简介
攻读硕士学位期间研究成果



本文编号：3857161