Kirrel1蛋白对骨骼肌成肌细胞分化及融合的影响
发布时间：2023-12-02 13:29
研究背景细胞-细胞融合对于多细胞生物的发育至关重要。骨骼肌是由许多肌纤维组成的独特组织,每个肌纤维都是由成百上千个成肌细胞相互融合的产物。成肌细胞融合不仅对胚胎发育过程中骨骼肌形成至关重要,而且对成人肌卫星细胞介导的肌肉再生也至关重要。为了发生成肌细胞融合,两个融合伴侣必须相互识别粘附其质膜,打开融合孔以允许细胞中的物质相互交换,并最终合并成一个细胞。在果蝇胚胎中,有两种不同类型的成肌细胞,肌肉创始细胞(founder cells,FCs)和融合感受态成肌细胞(fusion competent myoblasts,FCMs),FCs和FCMs膜表面表达的不同蛋白之间相互作用,促成它们相互识别和粘附。在FCs中,两个旁系同源物Dumbfounded(Duf)亦被称为Kin-of-Irre(Kirre)和Roughest(Rst)亦被称为Irre C,在成肌细胞融合过程中具有多种功能。在FCMs中,Sticks and stones(Sns)作为主要胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs),其功能部分由其旁系同源物Hibris(Hbs)补偿。类似胚胎肌肉的发育...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
前言
摘要
Abstract
英文缩略词表
第1章 文献综述
1.1 骨骼肌
1.1.1 骨骼肌在哺乳动物胚胎发育中形成过程
1.1.2 骨骼肌损伤后的重建过程
1.2 成肌细胞及成肌细胞融合过程
1.3 Nephrin蛋白在骨骼肌形成及重建过程中作用的研究
1.4 Kirrel蛋白在骨骼肌形成及重建过程中作用的研究
1.5 Nephrin蛋白和Kirrel蛋白的交联作用研究进展
1.6 本研究的立题依据与研究内容
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞和动物
2.1.2 质粒和菌株
2.2 实验试剂
2.2.1 细胞培养相关试剂
2.2.2 Western Blot相关试剂
2.2.3 RNA提取及RT-PCR相关试剂
2.2.4 其他相关试剂
2.2.5 主要试剂配制方法
2.3 实验仪器
2.4 实验方法
2.4.1 细胞培养
2.4.2 细菌转化
2.4.3 质粒小提
2.4.4 转染
2.4.5 免疫荧光染色
2.4.6 RNA提取
2.4.7 逆转录
2.4.8 RT-PCR
2.4.9 Western Blot
2.4.10 小鼠肌肉损伤模型建立
2.5 统计学方法
第3章 结果
3.1 Kirrel A和Kirrel B在C2C12细胞融合和小鼠骨骼肌损伤修复过程中m RNA的表达
3.1.1 半定量RT-PCR和RT-q PCR检测Kirrel A和Kirrel B在C2C12细胞分化融合过程中的m RNA的表达变化
3.1.2 半定量RT-PCR和RT-q PCR检测Kirrel A和Kirrel B在小鼠肌肉损伤后重建过程中m RNA的表达变化
3.2 建立C2C12：Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA稳转细胞系
3.2.1 Western Blot在蛋白水平上检测Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1- sh RNA在细胞系中敲低效果
3.2.2 半定量RT-PCR和RT-q PCR在m RNA水平上检测Kirrel A-、 Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA在C2C12细胞系中敲低Kirrel A和Kirrel B效果
3.3 细胞免疫荧光检测myosin蛋白探究敲低Kirrel1、Kirrel A、Kirrel B对C2C12细胞分化融合的影响
3.3.1 细胞免疫荧光检测敲低Kirrel1对C2C12细胞分化融合的影响
3.3.2 细胞免疫荧光检测敲低Kirrel A对C2C12细胞分化融合的影响
3.3.3 细胞免疫荧光检测敲低Kirrel B对C2C12细胞分化融合的影响
3.4 Western Blot检测myogenin和myosin蛋白探究敲低Kirrel1、Kirrel A、Kirrel B对C2C12细胞分化融合的影响
3.4.1 Western Blot检测敲低Kirrel1、Kirrel A对C2C12细胞分化融合的影响
3.4.2 Western Blot检测敲低Kirrel B对C2C12细胞分化融合的影响
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介
致谢
本文编号：3869766
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
前言
摘要
Abstract
英文缩略词表
第1章 文献综述
1.1 骨骼肌
1.1.1 骨骼肌在哺乳动物胚胎发育中形成过程
1.1.2 骨骼肌损伤后的重建过程
1.2 成肌细胞及成肌细胞融合过程
1.3 Nephrin蛋白在骨骼肌形成及重建过程中作用的研究
1.4 Kirrel蛋白在骨骼肌形成及重建过程中作用的研究
1.5 Nephrin蛋白和Kirrel蛋白的交联作用研究进展
1.6 本研究的立题依据与研究内容
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞和动物
2.1.2 质粒和菌株
2.2 实验试剂
2.2.1 细胞培养相关试剂
2.2.2 Western Blot相关试剂
2.2.3 RNA提取及RT-PCR相关试剂
2.2.4 其他相关试剂
2.2.5 主要试剂配制方法
2.3 实验仪器
2.4 实验方法
2.4.1 细胞培养
2.4.2 细菌转化
2.4.3 质粒小提
2.4.4 转染
2.4.5 免疫荧光染色
2.4.6 RNA提取
2.4.7 逆转录
2.4.8 RT-PCR
2.4.9 Western Blot
2.4.10 小鼠肌肉损伤模型建立
2.5 统计学方法
第3章 结果
3.1 Kirrel A和Kirrel B在C2C12细胞融合和小鼠骨骼肌损伤修复过程中m RNA的表达
3.1.1 半定量RT-PCR和RT-q PCR检测Kirrel A和Kirrel B在C2C12细胞分化融合过程中的m RNA的表达变化
3.1.2 半定量RT-PCR和RT-q PCR检测Kirrel A和Kirrel B在小鼠肌肉损伤后重建过程中m RNA的表达变化
3.2 建立C2C12：Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA稳转细胞系
3.2.1 Western Blot在蛋白水平上检测Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1- sh RNA在细胞系中敲低效果
3.2.2 半定量RT-PCR和RT-q PCR在m RNA水平上检测Kirrel A-、 Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA在C2C12细胞系中敲低Kirrel A和Kirrel B效果
3.3 细胞免疫荧光检测myosin蛋白探究敲低Kirrel1、Kirrel A、Kirrel B对C2C12细胞分化融合的影响
3.3.1 细胞免疫荧光检测敲低Kirrel1对C2C12细胞分化融合的影响
3.3.2 细胞免疫荧光检测敲低Kirrel A对C2C12细胞分化融合的影响
3.3.3 细胞免疫荧光检测敲低Kirrel B对C2C12细胞分化融合的影响
3.4 Western Blot检测myogenin和myosin蛋白探究敲低Kirrel1、Kirrel A、Kirrel B对C2C12细胞分化融合的影响
3.4.1 Western Blot检测敲低Kirrel1、Kirrel A对C2C12细胞分化融合的影响
3.4.2 Western Blot检测敲低Kirrel B对C2C12细胞分化融合的影响
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介
致谢
本文编号：3869766
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