JZTx-14作用于原核和哺乳动物电压门控钠通道的分子机制

发布时间：2023-12-02 15:02

　　本研究从敬钊缨毛蛛毒液中分离纯化出一个新的作用于电压门控钠离子通道的毒素,JZTx-14。MALDI-TOF质谱分析确定JZTx-14的平均分子量为3422.17 Da(M+H⁺)。结合Edman降解测序、溶液酶解、LC-MS分析和cDNA文库搜库确定了JZTx-14的全长氨基酸序列。JZTx-14由31个氨基酸组成,序列中包含三对二硫键,是一个典型的ICK模体毒素(二硫键模式:C1-C4,C2-C5,C3-C6)。活性分析表明JZTx-14是一个非选择性哺乳动物电压门控钠离子通道和细菌电压门控钠离子通道NaChBac的抑制剂。JZTx-14可以高亲和力抑制哺乳动物NaV1.2-NaV1.8通道和NaChBac通道的电流(IC₅₀均小于1μM),对于NaV1.9通道,JZTx-14主要抑制其快失活,仅轻微抑制其峰电流。分析JZTx-14对NaV1.5/1.9DIIS3–4嵌合体通道[将NaV1.5通道结构域二S3-S4跨膜螺旋间的序列(S3-4胞外环)替换成NaV1.9通道的相应区域]的活性发现JZTx-14能结合NaV1.5通道结构域二S3...

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Abstract
第一章 电压门控钠离子通道研究进展
    1.1 电压门控钠离子通道的结构与功能概论
    1.2 电压门控钠离子通道(NaV1.1-1.9)的病理功能
        1.2.1 电压门控钠离子通道的组织分布
        1.2.2 电压门控钠离子通道功能失调致离子通道病的相关研究进展
        1.2.3 电压门控钠离子通道在肿瘤细胞中的表达与功能
    1.3 作用于电压门控钠离子通道的毒素
    1.4 电压门控钠离子通道研究展望
第二章 JZTx-14 与细菌和哺乳动物电压门控钠离子通道相互作用的分子机制
    2.1 前言
    2.2 实验材料
    2.3 实验方法
        2.3.1 JZTx-14 的分离纯化和N-端序列测定
        2.3.2 JZTx-14的C-末端序列测定
        2.3.3 电压门控钠离子通道突变体质粒构建
        2.3.4 细胞培养与转染
        2.3.5 全细胞膜片钳记录
        2.3.6 数据处理
    2.4 实验结果与分析
        2.4.1 JZTx-14 的分离纯化与鉴定
        2.4.2 JZTx-14 对哺乳动物电压门控钠离子通道的活性分析
        2.4.3 JZTx-14 是一个电压门控钠离子通道的门控调制剂
        2.4.4 JZTx-14 对细菌钠离子通道的活性分析
        2.4.5 JZTx-14 作用于NaChBac的分子机制研究
    2.5 讨论
参考文献
缩写表(中英文对照)
攻读学位期间发表论文情况
致谢



本文编号：3869905