实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用

发布时间：2024-02-14 19:08

　　目的建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量PCR检测方法。方法依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测上述细胞因子转录水平的real-time PCR方法。结果用建立的荧光定量PCR方法,检测牛型布鲁氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬细胞后,巨噬细胞Th1和Th2型细胞因子的转录水平。最低检测量为102拷贝/μL,线性关系很好,R2≥0.982,该方法具有良好的特异性和重复性。结论成功建立了检测巨噬细胞中Th1和Th2型细胞因子转录水平的荧光定量PCR方法。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 细胞培养
        1.2.3 RNA提取、 反转录及定量
        1.2.4 细胞因子实时定量PCR检测方法的建立
        1.2.5 实时定量PCR检测布鲁氏菌感染巨噬细胞中细胞因子mRNA含量
2 结果
    2.1 RAW264.7巨噬细胞Th1、 Th2型细胞因子RT-PCR及引物特异性鉴定
    2.2 标准曲线的建立
    2.3 感染布鲁氏菌S2308株的巨噬细胞中6种细胞因子mRNA的实时荧光定量检测结果
3 讨论



本文编号：3898461