合成基因IL-6在大肠杆菌中表达及融合蛋白鉴定分析

发布时间：2024-02-21 12:13

　　目的合成IL-6的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得纯化的融合蛋白IL-6。方法采用基于PAS(PCR-based accurate synthesis)的方法,设计全长拼接引物,合成基因IL-6,并将其插入载体pCzn1,获得的重组质粒pCzn1-IL-6,化学法将其转化入大肠杆菌TOP10进行克隆。将克隆得到的阳性克隆子转化入大肠杆菌Arctic Express后用IPTG诱导剂诱导融合蛋白的表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白表达效果。结果经测序和双酶切验证,正确构建了重组质粒pCzn1-IL-6,重组质粒成功转入表达菌株,IL-6原核蛋白在表达菌株中以包涵体和可溶性形式稳定表达,通过Ni柱亲和纯化获得纯化的目标蛋白。结论 IL-6原核蛋白在大肠杆菌中成功表达,为进一步的应用研究打下基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒与菌株
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 IL-6基因合成
        1.2.2 重组质粒pCzn1-IL-6构建
        1.2.3 质粒酶切鉴定
        1.2.4 原核蛋白的诱导表达及鉴定
        1.2.5 原核蛋白的Ni柱亲和纯化及结果分析
2 结 果
    2.1 pCzn1-IL-6测序验证
    2.2 质粒酶切鉴定
    2.3 原核蛋白的诱导表达及鉴定
    2.4 原核蛋白Ni柱纯化及结果分析
    2.5 Western Blot结果分析
3 讨 论



本文编号：3905405