SEC5蛋白与InsP 3 R相互作用调控抗白念珠菌固有免疫

发布时间：2024-03-09 01:54

　　白念珠菌作为条件致病菌寄生在健康人体的口腔和小肠粘膜中,当机体免疫力低下时,其可侵入机体引发系统性感染。系统性白念珠菌感染是最常见的院内真菌感染,包括念珠菌血症和深部组织感染。系统性白念珠菌感染患者死亡率较高,即使接受药物治疗,死亡率仍可高达40%。因此,在治疗过程中,改善患者的机体免疫力被认为是增强治疗效果的理想手段。入侵机体后,白念珠菌表面的病原相关分子模式被免疫细胞中表达的模式识别受体识别后激起机体的免疫反应。目前研究已发现多种识别白念珠菌的模式识别受体,如Toll样受体,C型凝集素受体等。白念珠菌表面的β葡聚糖和甘露糖能够分别结合C型凝集素受体Dectin-1和Dectin-2,激活磷脂酶Cγ(PLCγ),产生(1,4,5)-三磷酸肌醇(inositol 1,4,5-trisphosphate,InsP₃)。InsP₃结合InsP3R(InsP₃R)引发内质网中钙离子的释放,使胞内钙离子浓度升高。细胞内钙离子调控多种细胞免疫功能,如活性氧的产生,细胞因子分泌和吞噬等。本课题从酵母双杂交实验筛选到SEC5蛋白能够结...

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词
前言
    参考文献
第一部分 SEC5与InsP₃R相互作用
    1.1 前言
    1.2 材料与方法
        1.2.1 实验主要材料
        1.2.2 主要实验方法
    1.3 实验结果
        1.3.1 酵母双杂交结果验证
        1.3.2 SEC5蛋白与InsP₃R细胞内免疫荧光共定位
        1.3.3 SEC5蛋白与InsP₃R细胞内FRET实验
        1.3.4 InsP₃R结构中与SEC5相互作用区域的研究
        1.3.5 SEC5结构中与InsP₃R相互作用区域的研究
    1.4 小结
    参考文献
第二部分 SEC5-InsP₃R相互作用影响InsP₃R离子通道活性
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验主要材料
        2.2.2 主要实验方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 .HEK293细胞Crynkiewicz常数测定。
        2.3.2 SEC5表达水平对InsP₃R介导的细胞内钙离子释放的影响
        2.3.3 SEC5与InsP₃R相互作用影响InsP₃R介导的钙离子释放
        2.3.4 SEC5结合InsP₃R影响InsP₃R离子通道活性
    2.4 小结
    参考文献
第三部分 SEC5蛋白与InsP₃R相互作用影响巨噬细胞对白念珠菌的吞噬
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验主要材料
        3.2.2 主要实验方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 BMDM细胞吞噬起始阶段细胞内钙离子浓度升高
        3.3.2 InsP₃R介导的钙离子释放影响巨噬细胞对白念珠菌的吞噬作用
        3.3.3 SEC5蛋白影响巨噬细胞对白念珠菌的吞噬作用
        3.3.4 SEC5蛋白与InsP₃R在吞噬小体上共定位
        3.3.5 白念珠菌刺激促进SEC5与InsP₃R蛋白结合
        3.3.6 干扰SEC5与InsP₃R的相互作用抑制BMDM细胞对白念珠菌的吞噬
        3.3.7 体内干扰SEC5与InsP₃R的相互作用影响白念珠菌清除
    3.4 小结
    参考文献
第四部分 SEC5与InsP₃R相互作用调控TBK1-IRF3通路介导抗白念珠菌天然免疫反应
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验主要材料
        4.2.2 主要实验方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 SEC5稳定低表达的RAW264.7细胞株建立
        4.3.2 SEC5蛋白调控白念珠菌引起的TBK1-IRF3信号通路的激活
        4.3.3 白念珠菌刺激促进InsP₃R-SEC5-TBK1复合体形成
        4.3.4 H1多肽促进SEC5蛋白与TBK1结合,促进TBK1酶活
        4.3.5 SEC5-RBD与InsP₃R-H1竞争结合SEC5-2段
    4.4 小结
    参考文献
总结
综述
    参考文献
在校期间论文情况
致谢



本文编号：3922719