人HMG盒转录因子1基因shRNA质粒的构建及其功能鉴定

发布时间：2024-03-11 02:02

　　目的构建人HMG盒转录因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)基因shRNA质粒,并探讨该基因的相关功能。方法合成HBP1基因干扰序列,将其插入至慢病毒表达载体pLL3. 7中,构建重组质粒pLL3. 7-shHBP1,经TurboFectTM脂质体介导转染HEK293T细胞,收集含病毒的培养基,分别感染HeLa及HepG2细胞,经puromycin持续筛选,获得稳定转染细胞株。Real-time PCR及Western blot法分别检测HeLa及HepG2细胞中HBP1基因m RNA转录及蛋白表达水平,MTT及流式细胞术分别检测HBP1基因抑制对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。结果经测序鉴定,重组质粒pLL3. 7-shHBP1构建正确。HeLa及HepG2细胞中HBP1基因mRNA转录及蛋白表达水平均明显下调(P <0. 01);HBP1基因抑制后,HeLa细胞的增殖速度明显加快(P <0. 01),细胞凋亡明显减少(P <0. 01)。结论成功构建了HBP1基因shRNA质粒,抑制HBP1表达后可使HeLa细胞的增殖速度加...

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【部分图文】：

图2Westernblot法检测各组细胞中HBP1蛋白的表达

与相应对照组比较，HeLa-shHBP1-1、HeLa-shHBP1-2、HepG2-shHBP1-1、HepG2-shHBP1-2组细胞中HBP1蛋白的水平显著下降，且差异有统计学意义（t分别为23.10、56.18、23.81、15.27,P<0.01），见图2和图3。表明各....

图3各组细胞中HBP1蛋白的表达水平

图2Westernblot法检测各组细胞中HBP1蛋白的表达2.4HBP1基因抑制对Hela细胞增殖的影响

图4MTT法测定HeLa细胞的生长曲线

对照组及HeLa-shHBP1-1组HeLa细胞的凋亡率分别为45.37%和25.1%。与对照组比较，稳转细胞株HeLashHBP1-1抑制HBP1后，细胞凋亡明显减少，且差异有统计学意义（t=7.47,P<0.01），见图5。图5流式细胞术检测HBP1基因抑制对HeLa细胞凋....

图5流式细胞术检测HBP1基因抑制对HeLa细胞凋亡的影响

图4MTT法测定HeLa细胞的生长曲线3讨论

本文编号：3925653