巴利昔单抗抑制人T淋巴细胞活化与增殖的体外实验研究

发布时间：2024-03-20 00:15

　　目的:抗人CD25单克隆抗体(巴利昔单抗)是临床器官移植常用的免疫诱导治疗药物,虽然理论上其主要通过阻断T淋巴细胞激活的第三信号发挥免疫抑制作用,但其对T细胞活化、增殖以及细胞因子分泌的影响却鲜有报道。本实验通过在体外建立稳定的抗原非特异性T淋巴细胞反应体系及同种异体抗原特异性混合淋巴细胞反应(MLR)体系,利用舒莱(巴利昔单抗,Novartis)进行干预,观察舒莱抑制T细胞活化及增殖反应的强度,为阐明巴利昔单抗的免疫学作用机制提供实验证据。方法:体外分别建立抗原特异性人T淋巴细胞反应及抗原非特异性人T淋巴细胞反应体系。其中抗原非特异性T淋巴细胞反应是利用抗人CD3/CD28抗体直接刺激T细胞活化增殖,刺激后第3天使用抗人CD3、CD4、CD8、CD25及CD69等流式抗体检测反应性T细胞活化及增殖情况,并留取培养体系的上清做细胞因子检测。而抗原特异性T淋巴细胞反应则是首先分离不同健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),其中一个个体的PBMC作为MLR的反应细胞,另一个体的PBMC进行放射照射灭活后作为MLR的刺激细胞,应...

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.在T细胞未活化的对照组中，与正常对照和二抗对照组相比，舒莱结合组IgG二抗的G.Mean值较高

体外分离人PBMC，与舒莱在4°共孵育30分钟，之后再加入抗人Ig抗来检测舒莱在体外与T细胞的结合率。结果如图1所示，舒莱在体外与T细胞结合作用未受影响。且随着T活化程度的增高，舒莱的结合率越高。

图2.因T细胞增殖存在个体差异，故本实验T细胞增殖率以抗人CD3/CD28抗体刺激组为标准，刺激组增殖率记为100%

图2.因T细胞增殖存在个体差异，故本实验T细胞增殖率以抗人CD3/CD28抗体刺激组为标准，刺激组增殖率记为100%。抗CD3/CD28抗体刺激3天后CD4+T和CD8+T的增殖情况用流式进行分析。利用flowjo（流式分析软件）圈出总淋巴细....

图4.通过设立阴性对照组、单加CD25抗体组和加入舒莱（Simulect）孵育后再加CD25抗

CD25G.Mean值的下降有显著差异,且由图可见，低浓度（0.001μg/ml-0.01μg/ml）与不同浓度间CD25G.Mean值也有明显差异。图E、F结果显示，加入不同浓度舒莱后，CD4+T和CD8+T细胞表面CD69表达有所上升，且高浓度组（0.1μg....

图5.应用CBA技术进行细胞因子检测并用Flowjo分析细胞因子IL-2和IFN-γ分泌情况

体后检测CD25流式抗体的结合情况，并使用流式进行分析。可以看到，加入舒莱组和单加CD25流式抗体组CD25流式抗体结合情况并无差异，提示CD25流式抗体并未与舒莱竞争性结合。4.使用舒莱后不能抑制T淋巴细胞产生IL-2而对分泌IFN-γ有轻微的抑制作用....

本文编号：3932678