抗淋巴细胞激活基因3(LAG-3)全人源抗体的制备

发布时间：2024-03-21 22:08

　　目的淋巴细胞激活基因3(LAG-3)是一个极具潜力的肿瘤治疗靶点。本研究旨在从大容量全人源噬菌体抗体库中筛选抗LAG-3的单链抗体(scFv),将其转化为完整的全人源抗体。方法从全人源噬菌体抗体库,筛选抗LAG-3全人源噬菌体scFv,ELISA鉴定噬菌体scFv的特异性,采用表面等离子共振技术(SPR)测定其亲和力,再通过真核表达系统获得抗LAG-3全人源完整抗体。结果通过3轮筛选富集,获得了4个具有特异结合活性的scFv。亲和力测定最高的达到3.48×10^-10。再通过构建完整的抗LAG-3全人源抗体表达载体,经真核细胞表达、纯化后,获得了3株特异性抗LAG-3全人源抗体。结论利用大容量全人源噬菌体抗体库,成功筛选并表达出3种高亲和力和特异性的抗LAG-3全人源抗体。

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【部分图文】：

图1ELISA筛选抗LAG-3噬菌体scFv

表1抗LAG-3噬菌体scFv各轮筛选情况筛选轮次投入量产出量回收率12.00×10136.97×1053.49×10-824.95×10124.20×1058.48×10-836.02×10121.25×1062.08×10-7注释:回收率=....

图2ELISA鉴定抗LAG-3噬菌体scFv的特异性

图1ELISA筛选抗LAG-3噬菌体scFv2.2抗LAG-3噬菌体scFv可变区基因序列分析

图3抗人LAG-3-scFv轻重链可变区扩增电泳图

采用普通PCR技术扩增轻重链可变区,采用10g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物,条带大小在350bp左右(图3)。随后,构建重组载体,转化DH5α感受态细胞,随机挑取单个菌落扩大培养。小量提取质粒,进行双酶切反应,经10g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定(图....

图4抗LAG-3完整真核表达载体双酶切电泳图

图3抗人LAG-3-scFv轻重链可变区扩增电泳图2.5SDS-PAGE鉴定抗LAG-3完整人源抗体分离纯化

本文编号：3934201