CRISPR/Cas9基因编辑技术构建5型磷酸二酯酶基因敲除鼠的模型及表型分析

发布时间：2024-04-12 02:23

　　目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立5型磷酸二酯酶(PDE5)基因敲除小鼠模型并分析小鼠表型,初步探讨PDE5基因敲除对小鼠各项生命指标的影响。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过胚胎显微注射移植法引导Cas9裂解酶裂解PDE5基因,删除第2外显子589个核苷酸构建敲除小鼠模型,鼠尾DNA做聚合酶链反应和测序鉴定基因型,将阳性PDE5基因敲除鼠和C57BL/6J背景鼠回交,再次通过鼠尾DNA做聚合酶链反应和测序鉴定基因型验证阳性PDE5敲除鼠并繁育。选择8只雄性C57BL/6J野生型小鼠及8只雄性PDE5基因敲除纯合子小鼠,通过观察2组小鼠生长发育情况,利用病理切片和超声心动图检测心脏结构和功能,检测全血细胞计数和生化指标,进行开场实验,分析PDE5基因敲除小鼠的表型。结果 PDE5基因敲除小鼠已成功繁育鉴定,子代基因敲除纯合型小鼠无胚胎期致死现象且生长正常,与野生型小鼠相比外观、生长发育未见明显差异。PDE5基因敲除对小鼠的心脏形态及功能无明显影响;但基因敲除鼠的血小板计数、中性粒细胞计数及百分比均明显低于野生鼠[(894±74)×109/L比(1 052±15...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 动物
    1.2 方法
        1.2.1 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建PDE5基因敲除鼠模型
        1.2.2 生长发育检测
        1.2.3 病理切片及染色
        1.2.4 超声心动图检测心脏功能
        1.2.5 全血细胞计数检测
        1.2.6 生化检测
        1.2.7 开场实验检测小鼠运动能力和焦虑状态
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 成功建立PDE5全身性基因敲除鼠
    2.2 基因敲除鼠生长发育情况
    2.3基因敲除鼠心脏结构及功能
    2.4 基因敲除鼠全血细胞计数检测
    2.5 基因敲除鼠生化指标
    2.6 基因敲除鼠运动能力
    2.7 基因敲除鼠焦虑状态
3 讨论



本文编号：3951512