不同性别肾缺血再灌注损伤模型小鼠MicroRNA的表达谱分析

发布时间：2017-05-26 00:02

  本文关键词：不同性别肾缺血再灌注损伤模型小鼠MicroRNA的表达谱分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过观察不同性别小鼠肾缺血再灌注损伤前后肾脏组织中Micro RNA表达差异,找出具有显著差异的Micro RNA,研究Micro RNA在不同性别小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法:BALB/c小鼠随机分为4组进行不同处理:T1(雄性肾缺血45min再灌注24h组)、T2(雌性肾缺血45min再灌注24h组)、C1(雄性假手术组)、C2(雌性假手术组),每组20只。BALB/c小鼠术前禁食12 h,用10%水合氯醛作为麻醉剂(10 m L/kg),沿腹部正中做一切口,进入腹腔,找到肾蒂,用无损伤微型动脉夹迅速阻断T1、T2组小鼠双侧肾脏血供,此时可见肾脏在30s内由鲜红变酱紫色,则表示夹闭成功,阻断45 min后去除动脉夹可见肾脏迅速由酱紫色恢复原来颜色(鲜红色),分层缝合关闭腹腔并滴入1-2ml生理盐水保持腹腔湿润[1.]。C1、C2假手术组找到肾蒂后不阻断肾蒂血流,术中应用生理盐水使小鼠保持充分的水化,待45 min后,分层缝合关闭腹腔术后将小鼠放置在26度的恒温房中饲养,保持充足的食物和水。术后小鼠存活24 h表示建模成功。通过Micro RNA基因芯片技术检测各组小鼠肾脏Micro RNA表达量后,对比各组小鼠间Micro RNA表达量,找出具有显著差异的Micro RNA;接着采用实时荧光定量PCR检测各组中具有显著差异的Micro RNA表达量,其结果是否与Micro RNA芯片相符。结果:(1)T1(雄性肾缺血45min再灌注24h组)、T2(雌性肾缺血45min再灌注24h组)、C1(雄性假手术组)、C2(雌性假手术组),分别为80%、100%、100%、100%。雌性肾缺血再灌注组与与雄性肾缺血再灌注组比较后血清肌酐及血清尿素氮变化具有明显差异性。而雌性假手术组与雄性假手术组血清肌酐及血清尿素氮变化无统计学意义。(2)C1(雄性IRI 0min组)、C2(雌性IRI 0min组)组中肾组织病理结构基本正常,仅可见局部肾小管上皮水肿及少量变性;T2(雌性IRI 45min组)组显微镜下,可见肾小管上皮细胞坏死、崩解脱落以及细胞核浓缩、碎裂、核溶解,箭头所示。部分肾小管管腔扩张、管腔轮廓模糊;T1(雄性IRI 45min组)组中仍可见的肾小管上皮细胞坏死、空泡变性、肾小管刷状缘扁平以及细胞核浓缩、碎裂、核溶解。RAbb半定量对模型肾进行肾小管病理损伤评分C2(雌性IRI 0min组)、T2(雌性IRI 45min组)、之间差异有统计学意义,P0.05;C1(雄性IRI 0min组)及T1(雄性IRI 45min组)组之间无统计学意义,P0.05,如图2。(3)四组小鼠中Micro RNA的表达存在明显差异,在T2(雌性肾缺血45min再灌注24h组)与T1(雄性肾缺血45min再灌注24h组)对比发现有表达上调的Micro RNA有5个;T2(雌性肾缺血45min再灌注24h组)与C2(雌性假手术组)对比发现有差异表达的Micro RNA有29个,其中上调的有Micro RNA有25个,下调的Micro RNA有4个;T1(雄性肾缺血45min再灌注24h组)与C1(雄性假手术组)对比发现有差异表达的Micro RNA有38个,其中上调的Micro RNA有9个,下调的Micro RNA有29个;C2(雌性假手术组)与C1(雄性假手术组)对比发现有差异表达的Micro RNA有102个,其中上调Micro RNA的有22个,下调的MicroRNA有80个。(4)对比四组BALB/c小鼠肾组织的Micro RNA表达,实验发现mir-21及mir-664在各组肾脏组织中的表达均有着明显差异性,其中雄性假手术组与雌性假手术组相比mir-21和mir-664表达相近,雄性肾缺血再灌注组与雄性假手术组相比上调分别为1.5倍和1.3倍,而雌性肾肾缺血再灌注组与雄性假手术组相比分别上调2倍和2.2倍,采用实时荧光定量PCR检测mir-21及mir-664的表达量,其结果与基因芯片相符。结论:(1)成功构建了BALB/c小鼠血肾缺血再灌注损伤模型;(2)不同性别小鼠对肾缺血再灌注损伤的敏感性及耐受性存在明显差异;(3)不同性别间小鼠肾肾缺血再灌注损伤后肾组织Micro RNA表达存在明显差异,其中mir-21及mir-664的表达量尤为明显。
【关键词】：肾缺血再灌注损伤 MicroRNA基因芯片 Mir-21 Mir-664
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692;R-332
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英缩略词表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料与方法12-24
• 2.1 主要实验设备及器械12-13
• 2.2 实验材料13
• 2.3 主要试剂13-14
• 2.4 主要溶液及试剂配制14-16
• 2.4.1 0.1%DEPC14
• 2.4.2 0.5×TBE缓冲液14-15
• 2.4.3 溴化乙锭(EB，，10 mg／m1)溶液15
• 2.4.4 20XSSPE溶液15
• 2.4.5 0.2%SDS溶液15
• 2.4.6 20XSSC溶液15
• 2.4.7 Gene Expression Wash Buffe I15-16
• 2.4.8 Gene Expression Wash Buffe II16
• 2.4.9 Gene Expression Wash Buffe III16
• 2.5 实验技术与方法16-24
• 2.5.1 动物饲养16
• 2.5.2 小鼠肾IRI模型构建16-17
• 2.5.3 血清肌酐、尿素氮检测17
• 2.5.4 肾脏病理组织学检测17-18
• 2.5.5 Micro RNA芯片检测18-21
• 2.5.6 荧光定量PCR实验验证Micro RNA的准确性21-23
• 2.5.7 数据处理和统计23-24
• 第3章 结果24-31
• 3.1 模型构建的评估24-26
• 3.1.1 手术成功率24
• 3.1.2 小鼠经历不同时间肾缺血再灌注损伤后血清肌酐、尿素氮变化24-25
• 3.1.3 肾组织病理学评估25-26
• 3.2 Micro RNA芯片结果26-30
• 3.2.1 RNA完整性检测26-27
• 3.2.2 Micro RNA芯片筛选结果27-29
• 3.2.3 mi RNA芯片差异表达数据聚类分析29-30
• 3.3 荧光定量PCR检测的相关结果30-31
• 第4章 讨论31-35
• 第5章 结论35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-41
• 攻读学位期间的研究成果41-42
• 综述42-48
• 参考文献46-48

【参考文献】

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本文编号：395297