雄性小鼠减数分裂启动相关蛋白谱系的构建及初步的功能研究

发布时间：2017-05-26 14:22

  本文关键词：雄性小鼠减数分裂启动相关蛋白谱系的构建及初步的功能研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：减数分裂是生殖细胞不同于体细胞所特有的细胞分裂方式,在减数分裂启动过程中有许多基因与蛋白的表达与之密切相关。小鼠胚胎原始生殖细胞PGC迁移到生殖嵴并在此定位以及性别决定基因SRY表达后,雌性生殖嵴中较高浓度的维甲酸(retinoic acid,RA)诱导生殖细胞表达Stra8(stimulated by retinoic acid gene 8),减数分裂启动并阻滞在第一次减数分裂前期的双线期,而雄性生殖细胞至出生后才开始启动减数分裂。已知RA是雌性和雄性生殖细胞减数分裂启动和正常进行的关键。但目前对于RA信号通路调控减数分裂启动的下游机制仍存在较大的争议,至今未形成一个完整的调控网络。为了全面了解雄性生殖细胞减数分裂启动的分子机制,我们以ICR小鼠为模式动物,运用蛋白质组学技术,构建了雄性小鼠减数分裂启动的特定时间点(PND8.5和PND10.5)的差异蛋白表达谱,筛选出差异倍数在1.5倍以上的104个蛋白,结合生物信息学分析这些差异蛋白在减数分裂启动过程中的作用,挑选出5个与RA信号通路密切相关的候选蛋白,通过Western Blot技术对这些蛋白在谱系中的变化趋势进行了验证;进一步我们利用定量Real-time PCR的方法,结合小鼠精原干细胞体外培养的技术平台,研究体外RA诱导后下游候选基因的表达变化。最后,我们挑选PDCD4(programmed cell death 4)蛋白开展初步功能研究,明确PDCD4在不同时间点小鼠睾丸组织中的细胞定位,推测其在精子发生过程中与精原细胞的正常分化,顺利进入减数分裂阶段密切相关。综上所述,对这些差异蛋白的鉴定及其功能分析为研究减数分裂相关基因和蛋白对精子发生的调控作用奠定基础,也为临床治疗男性不育提供大量潜在的分子靶标。
【关键词】：减数分裂启动 蛋白质组学 小鼠睾丸 维甲酸
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R321
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-6
• 前言6-8
• 实验材料与方法8-34
• 1. 实验材料8-18
• 2. 实验方法18-34
• 实验结果34-48
• 1. 雄性小鼠减数分裂启动特定时间点的确定34-35
• 2. 雄性小鼠减数分裂启动差异蛋白的鉴定35-42
• 3. 运用生物信息学对差异蛋白功能进行分析42-44
• 4. 运用Western Blot方法验证差异蛋白在谱系中的表达趋势44-45
• 5. 小鼠精原干细胞体外维甲酸诱导后基因表达变化45-46
• 6. PDCD4的免疫组织化学定位分析46-48
• 讨论48-52
• 小结52-53
• 参考文献53-59
• 综述59-77
• 参考文献69-77
• 硕士在读期间发表论文77-78
• 致谢78

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 胡明;对减数分裂的新理解[J];生物学通报;2000年01期

2 郭向东;核型与减数分裂的课程设计[J];卫生职业教育;2005年05期

3 卢宝荣;披碱草X球茎大麦属间杂种的减数分裂研究[J];遗传学报;1997年03期

4 关泽红;旭日干;;CDK2在精母细胞和卵母细胞减数分裂中的作用[J];生理科学进展;2008年02期

5 李义文,李洪杰,梁辉,唐顺学,贾双娥,沈天民,李振声,贾旭;荧光原位杂交分析小麦-簇毛麦杂种减数分裂与染色体易位[J];遗传学报;2000年04期

6 王珂;吴应积;;视黄酸在精子发生过程中引发减数分裂的信号通路[J];中华男科学杂志;2013年02期

7 王正询，林兆平，潘坤清;蕉类的细胞遗传学研究[J];遗传学报;1994年06期

8 白云,韩秀玲,王明艳;减数分裂材料的选择与压片技术的改进[J];华北煤炭医学院学报;2004年04期

9 史庆华,张坚宣,潘淑娟,张锡然,陈宜峰,单祥年,黄浩杰,余龙,赵寿元,郑其平,AdlerI．－D．;用GT重复多态性诊断21三体患者中超数21号染色体减数分裂起源的研究[J];遗传学报;1998年06期

10 姜芬,郑秀梅,林丽;蝗虫精巢减数分裂玻片标本制作的改进[J];福建医科大学学报;1998年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 彭永康;霍昕;于玲;;百合减数分裂不同时期细胞的显微分离与蛋白质电泳[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年

2 李浩;孟凡锐;国春策;山红艳;孔宏智;;MeiosisDB:一个综合的减数分裂数据库[A];生态文明建设中的植物学：现在与未来——中国植物学会第十五届会员代表大会暨八十周年学术年会论文集——第1分会场：系统与进化植物学[C];2013年

3 陆立立;程祝宽;高勇;张娟;张媛;陈建民;;OsREC8蛋白在水稻减数分裂中的作用[A];现代分子植物育种与粮食安全研讨会论文集[C];2011年

4 张亚楠;田惠桥;;白菜减数分裂中微管骨架异常与花粉雄性不育[A];中国植物学会植物细胞生物学2010年学术年会论文摘要汇编[C];2010年

5 张道生;陈建国;蔡得田;;水稻多倍体杂种减数分裂行为的细胞学和分子标记分析[A];湖北省植物生理学会第十五次学术研讨会论文集[C];2007年

6 张美佳;夏国良;;颗粒细胞上的配体NPPC及其受体NPR2维持小鼠卵母细胞减数分裂的阻滞[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

7 穆欣艺;温婧;郭萌;王建为;李舸;张华;边凤花;夏国良;;视黄酸与中肾对小鼠卵巢生殖细胞启动减数分裂的作用[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年

8 范衡宇;佟超;腾春波;杨增明;陈大元;孙青原;;Polo-like激酶在大鼠卵母细胞减数分裂成熟、受精和胚胎卵裂中的作用[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年

9 范衡宇;佟超;陈大元;孙青原;;核糖体S6蛋白激酶p90rsk在猪卵母细胞减数分裂成熟和受精中的作用[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年

10 崔映宇;;学生批判性思维能力在细胞生物学教学过程中的培养(Ⅰ)—求“同”与求“异”:以“有丝分裂”与“减数分裂”的比较为例[A];细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学术大会·武汉论文摘要集[C];2013年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 宝坻一中 李金秋;如何设计“开场白”[N];天津教育报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 谢辉蓉;促减数分裂甾醇对小鼠卵母细胞减数分裂的作用研究[D];中国农业大学;2004年

2 刘川;双酚A暴露对精母细胞减数分裂的影响及其机制研究[D];第三军医大学;2014年

3 刘文静;CDK2及其磷酸化调控小鼠减数分裂进程的研究[D];中国科学技术大学;2014年

4 王刘;无精子症患者的减数分裂研究[D];中国科学技术大学;2015年

5 王怡婧;cAMP调控小鼠卵母细胞第一次减数分裂和原始卵泡形成[D];中国农业大学;2015年

6 王f ;EVL-14/PDS-5和SCC-3是线虫有丝分裂和减数分裂必需的姐妹染色单体粘连蛋白[D];复旦大学;2004年

7 王士泉;芍药属两物种染色体结构变异杂合性研究[D];中国科学院研究生院（植物研究所）;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 唐彩艳;甘蓝型油菜减数分裂遗传调控的初步研究[D];华中农业大学;2015年

2 武彩云;男性不育患者减数分裂遗传重组与染色体行为的研究[D];安徽医科大学;2015年

3 邵彬彬;雄性小鼠减数分裂启动相关蛋白谱系的构建及初步的功能研究[D];南京医科大学;2015年

4 王少博;百合减数分裂在晚偶线期到粗线期特异表达基因的克隆和功能分析[D];兰州大学;2009年

5 白汝岚;MPF对精母细胞减数分裂调控作用的研究[D];西南大学;2008年

6 陆立立;OsREC8蛋白在水稻减数分裂中的作用[D];扬州大学;2011年

7 蒋汶洮;RA在硬骨鱼类减数分裂起始中作用的初步研究[D];西南大学;2012年

8 刘利杰;山羊卵母细胞减数分裂机制的初步研究[D];西北农林科技大学;2008年

9 池正昌;水稻减数分裂基因OsSGO1功能研究与分析[D];扬州大学;2010年

10 孟小倩;猪或小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中PKC和MAPK信号通路的对话及γ-微管蛋白定位研究[D];山东师范大学;2004年

  本文关键词：雄性小鼠减数分裂启动相关蛋白谱系的构建及初步的功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：397128