羊水干细胞定向及稳定分化为神经元样细胞体系的建立

发布时间：2024-05-19 21:53

　　背景:利用干细胞分化代替受损神经元的设想,已经逐渐受到科研工作者的关注。胚胎干细胞和诱导性多能干细胞虽然具有良好的神经元分化潜能,但由于接种活体动物具有致瘤性,限制了其进一步的深入研究。目的:建立稳定的羊水干细胞分选、培养、成神经诱导分化体系,探讨其作为神经元再生种子细胞的可行性。方法:经B超引导下,穿刺获取孕19-22周期间的羊水样本10 mL,磁珠分选其中c-Kit阳性的羊水干细胞。免疫荧光染色鉴定羊水干细胞标记物Oct-4、Sox2;RT-PCR检测羊水干细胞多次传代后干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达;羊水干细胞悬滴培养4 d观察拟胚体的形成情况;采用"两阶段"分步诱导羊水干细胞向神经元方向分化,免疫荧光染色观察Neuro D、Tuj1的表达。结果与结论:①羊水中可分选出大约1%的c-Kit阳性羊水干细胞;②(75.0±4.6)%的羊水干细胞表达Oct-4,(86.0±2.8)%的羊水干细胞表达Sox2;③RT-PCR方法检测干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达量并不随细胞传代数的增加而改变;④经悬滴培养可形成拟胚体并表达O...

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图1c-Kit+羊水干细胞呈成纤维样细胞形态(标尺为100μm)

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图2羊水干细胞标记物Sox2、Oct-4的表达(标尺为50μm)

图1c-Kit+羊水干细胞呈成纤维样细胞形态(标尺为100μm)图3RT-PCR检测第5代与第30代羊水干细胞的干细胞标记物表达量

图3RT-PCR检测第5代与第30代羊水干细胞的干细胞标记物表达量

图2羊水干细胞标记物Sox2、Oct-4的表达(标尺为50μm)图4羊水干细胞悬滴培养4d形成类似于胚胎干细胞的拟胚体

图4羊水干细胞悬滴培养4d形成类似于胚胎干细胞的拟胚体

图3RT-PCR检测第5代与第30代羊水干细胞的干细胞标记物表达量图5免疫荧光鉴定羊水干细胞Tuj1表达(标尺为100μm)

本文编号：3978509