小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞电穿孔转染条件的建立和验证

发布时间：2024-05-25 01:43

　　目的筛选并验证RAW264. 7细胞中电穿孔转染TRIB3过表达质粒和TRIB3 siRNA的条件,建立适用于RAW264. 7细胞的最佳电穿孔转染方案。方法通过改变脉冲电压、脉冲时长和质粒浓度等条件,将载体为p CMV6-Entry的TRIB3过表达质粒和TRIB3 siRNA转入RAW264. 7细胞,24 h后相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞存活率,72 h后Western Blot法检测TRIB3蛋白表达以验证目的基因表达改变情况。结果 (1)以不同脉冲电压转染时,110和120 mV组细胞形态和存活率与对照组无差异,130和140 mV组悬浮细胞较多、细胞存活率显著低于对照组(P<0. 01),120、130和140 mV组TRIB3蛋白表达显著增加(P<0. 05);(2)以不同脉冲时长进行转染时,10和20 ms组细胞形态和存活率与对照组无差异,30 ms组细胞存活率显著低于对照组(P<0. 01),20和30 ms组TRIB3蛋白表达显著增加(P<0. 01);(3)以不同质粒浓度进行转染时,2和4μg组细胞形态和存活率与对照组无差异...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 质粒构建与纯化
        1.2.2 RAW264.7细胞培养
        1.2.3 电穿孔转染
        1.2.4 CCK8法检测细胞存活率
        1.2.5 TRIB3蛋白表达检测
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 不同脉冲电压对细胞形态、存活率和目的基因表达的影响
    2.2 脉冲电压恒定时不同脉冲时长对细胞形态、存活率和目的基因表达的影响
    2.3 电压和电击时长恒定时不同质粒浓度对细胞形态、存活率和目的基因表达的影响
    2.4 电压和电击时长恒定时不同TRIB3 siRNA浓度对细胞形态、存活率和目的基因表达的影响
3 讨论



本文编号：3981521