人乳头瘤病毒16型表位嵌合病毒样颗粒的构建及免疫原性研究

发布时间：2024-07-05 21:50

　　目的制备E7_49-57表位嵌合病毒样颗粒,并进行免疫原性分析。方法利用分子模拟软件Discovery Studio预测HPV16 L1的E7_49-57最佳嵌合位点,将E7_49-57表位嵌入预测位点。构建pET28a-16L1-E7_49-57重组质粒,于大肠杆菌中诱导表达HPV16L1-E7_49-57蛋白并利用镍柱进行亲和层析纯化。于体外重组VLPs后,进行动态光散射粒径和透射电镜分析。用E7_49-57嵌合VLPs免疫小鼠,假病毒中和试验检测免疫血清中和抗体滴度。流式多因子法检测Th1和Th2型细胞因子水平。结果 HI loop区355/356为最佳表位嵌合位点。正确表达了HPV16 L1-E7_49-57蛋白并组装E7_49-57嵌合VLPs。E7_49-57嵌合VLPs免疫小鼠3次后,小鼠血清中和抗体滴度log10平均值达到4.23,略低于野生型VLPs(log10平均值为4.45)。但是,相对...

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【部分图文】：

图1最佳嵌合位点预测

收集重组菌诱导表达后的上清液,经镍柱HisTrapFF亲和层析,收集洗脱流分。SDS-PAGE电泳(图5),结果显示经镍柱纯化后得到较高纯度目的蛋白。蛋白免疫印迹(Westernblot)(图6)显示在55kD处出现目的斑带,证明目的蛋白表达正确。图2pET28a-16....

图2pET28a-16L1-E749-57重组质粒PCR鉴定

图1最佳嵌合位点预测图3HPV16L1-E749-57蛋白表达的SDS-PAGE分析

图3HPV16L1-E749-57蛋白表达的SDS-PAGE分析

图2pET28a-16L1-E749-57重组质粒PCR鉴定图4HPV16L1-E749-57蛋白可溶性鉴定

图4HPV16L1-E749-57蛋白可溶性鉴定

图3HPV16L1-E749-57蛋白表达的SDS-PAGE分析图5HPV16L1-E749-57蛋白纯化的SDS-PAGE分析

本文编号：4001589