热中性温度和冷环境中小鼠肝脏脂滴和线粒体的比较蛋白质组研究

发布时间：2024-10-03 00:56

　　目的:比较小鼠在热中性温度30?C,室温23?C,低温6?C环境中,肝脏脂滴及线粒体蛋白的变化,探讨小鼠肝脏在不同环境温度下糖脂代谢的变化及其机制。方法:将小鼠分别在三个温度下饲养1个月,分离纯化肝脏的脂滴,线粒体,进行比较蛋白组学分析,以及生化实验验证,结合生物信息学方法,分析小鼠肝脏在不同环境温度下糖脂代谢的变化。1.小鼠处理及肝脏变化分析:选取10周龄的C57BL/6雄鼠18只,随机分为3组,每组6只,分别饲养于热中性温度30?C,室温23?C,低温6?C,三个温度的培养箱中,每笼1只,喂食普通饲料,饲养1个月。1个月后断颈处死,测定肝脏重量、体重、糖原、甘油三酯。2.小鼠肝脏脂滴和线粒体的纯化:分别用蔗糖密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠肝脏脂滴(lipid droplets,LDs)及线粒体(mitochondria,MT)。3.纯化的脂滴和线粒体的质量评估:将纯化的脂滴、线粒体染色后进行形态学分析;对其蛋白进行电泳分离后进行银染分析;以及通过蛋白质免疫印迹方法,进行不同细胞组分标志蛋白的富集分析。4.脂滴及线粒体蛋白比较蛋白组学研究:利用6标串联质谱标签...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2荧光共聚焦，银染，免疫印迹，TLC法分析纯化的脂滴和线粒体A.用蔗糖密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离的脂滴和线粒体

图2荧光共聚焦，银染，免疫印迹，TLC法分析纯化的脂滴和线粒体A.用蔗糖密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离的脂滴和线粒体。B.用荧光共聚焦显微镜分析LipidTOXRed染色的脂滴，红色球状的为脂滴，标尺为5μm。C.用荧光共聚焦显微镜分析....

图3三个不同温度处理的小鼠肝脏脂滴和线粒体蛋白质谱分析

-54-图3三个不同温度处理的小鼠肝脏脂滴和线粒体蛋白质谱分析A．脂滴和线粒体样品标记及蛋白质谱分析流程图。B.按照两个温度蛋白之比（Ratio）大于1.2或者小于0.833的标准去筛选三个温度线粒体表达差异明显的蛋白（P0.1）。6个模式图代表T6/T23,....

图1脂滴的结构示意图

3脂滴与脂质代谢脂滴是一个由表面有蛋白的单层磷脂膜包被中性脂的多功能细胞器（图1），存在于从细菌到人类几乎所有的细胞中[17]。脂滴最早于1674年被列文虎克用显微镜在牛奶中发现。关于脂滴的形成有很多假说，现在最普遍接受的是脂滴来源于内质网，因为与中性脂合成

图2线粒体的结构示意图

图2线粒体的结构示意图，包括线粒体外膜和内膜。内膜向内凸起形成嵴为膜间隙，内膜里面的区域为线粒体基质。引自/micro.magnet.fsu.edu/cells/mitochondria/mitochondr保守的SLC25线粒体载体蛋白，但是对于丙PC蛋白[36]。线粒....

本文编号：4006566