铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究

发布时间：2024-10-05 00:12

　　目的旨在克服现有抗原筛选方法的不足,构建我国铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）临床分离株XN-1的全基因组文库,从中筛选PA疫苗的候选抗原,为防控PA感染打下基础。方法1.全基因组文库的构建:提取PA XN-1全基因组DNA,内切酶Sau3A I酶切DNA,内切酶BamH I酶切的载体pMal-c5x。通过连接酶将其与随机基因组片段连接,构建随机重组子质粒。转化随机重组子至大肠杆菌感受态细胞X-Blue中。挑选出随机重组子克隆,通过PCR反应和酶切鉴定等方法,对随机重组子进行初步鉴定,评价插入基因组片段的特点。IPTG诱导溶菌酶上清液的阳性重组子的MBP融合蛋白表达,SDS-PAGE检测其表达情况,从而构建PA XN-1全基因组文库。2.PA候选抗原的筛选及保护效果评价:为了进一步从随机重组子文库中筛选到PA疫苗候选抗原,本研究制备了抗MBP多克隆抗体,将其包被于ELISA板上,以捕获随机重组子表达的MBP融合蛋白。以PA感染患者恢复期血清作为一抗,检测随机重组子携带的未知抗原的反应性。测定强反应性抗原的编码序列,通过BLAST序列比对,获得强反应性抗原的...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1-1实验设计

重庆医科大学硕士研究生学位论文1.2实验设计如图1-1-1所示，提取PAXN-1全基因组DNA，使用内切酶Sau3AI酶切，回收100-1000bp大小的随机基因组片段，与经内切酶BamHI酶切后的载体pMal-c5x连接，构建随机重组子质粒，转化....

图1-1-2PAXN-1基因组与pMAL-c5x载体的电泳检测Fig.1-1-2ElectrophoresisofgenomeofPAXN-1andPmal-c5xvectors

图1-1-2PAXN-1基因组与pMAL-c5x载体的电泳检测1-1-2ElectrophoresisofgenomeofPAXN-1andPmal-c5xvectorsMarker,1.undigestedPAXN-1genome,2.....

图1-1-3随机重组子的BamHI酶切鉴定Fig.1-1-3IdentificationofrecombinantplasmidsbyBamHIdigestion

图1-1-3随机重组子的BamHI酶切鉴定Fig.1-1-3IdentificationofrecombinantplasmidsbyBamHIdigestionMarker,Lane1,3,5.undigestedrecombinant....

图1-1-4PCR检测插入片段的随机性Fig1-1-4Randomnessofinsertedsegments

图1-1-4PCR检测插入片段的随机性Fig1-1-4RandomnessofinsertedsegmentsM.DNAMarker,1.Sample1.7,2.Sample1.8,3.Sample1.22,4.Sample1.26,5....

本文编号：4007311