原代培养大鼠心肌细胞低氧损伤时琥珀酸G蛋白偶联受体通路的变化

发布时间：2025-01-07 04:24

　　 目的:探讨琥珀酸G蛋白偶联受体(GPR91)通路与低氧环境心肌细胞损伤之间的关系。方法:体外培养乳鼠原代心肌细胞,建立低氧模型,再利用siRNA干扰技术降低细胞内GPR91的表达,随机分为阴性对照组(CTL)、CTL+siGPR91组、琥珀酸盐组、琥珀酸盐+siGPR91组、低氧CTL组、低氧CTL+si GPR91组、低氧琥珀酸盐组和低氧琥珀酸盐+siGPR91组。10%氧含量下培养5 d后,CCK-8法检测心肌细胞的存活率、原代心肌细胞低氧模型的细胞ATP含量,Western blot法检测心肌损伤相关蛋白钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)、B型尿钠肽(BNP)、GPR91以及PI3K/Akt蛋白通路Akt及P-Akt的表达变化。结果:与CTL组比较,低氧环境下可见心肌细胞存活率降低,ATP含量减少,BNP及Ca MKⅡ表达上调(均为P<0.05);si RNA干扰组心肌细胞GPR91的表达水平下调(P<0.05),心肌细胞存活率上升、ATP含量增多、BNP及Ca MKⅡ蛋白表达下调、PI3K及下游信号分子Akt磷酸化水平降低(均为P<0.05)。结论:GPR9...

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

图2 原代心肌细胞的存活情况

原代心肌细胞的存活情况如图2所示，常氧环境下，与CTL组相比，CTL+siGPR91组心肌细胞存活率未见明显差异，加入琥珀酸后，细胞存活率出现降低(P<0.05),Suc+siGPR91组细胞存活率较Suc组升高(P<0.05)；低氧环境下，细胞存活率较常氧环境明显降低，与C....

图3 原代心肌细胞的ATP含量

原代心肌细胞的ATP含量见图3。常氧环境下，各实验组细胞ATP含量未见明显变化，各组ATP含量的差异均无统计学意义(P>0.05)。低氧环境下，CTL+siGPR91组及CTL组细胞ATP含量较常氧组出现下调，但组间差异均无统计学意义(P>0.05)；而Suc组及Suc+si....

图4 原代心肌细胞低氧模型中GPR91、BNP及Ca MKⅡ蛋白的表达变化

常氧环境下，Suc及Suc+siGPR91组细胞的CaMKⅡ表达明显较CTL组降低(P<0.01)，与Suc组比较，可见Suc+siGPR91组细胞CaMKⅡ随着GPR91的敲低出现减少(P<0.01)，说明GPR91可能对其造成影响；低氧环境下，较常氧环境总体CaMK....

图5 原代心肌细胞低氧模型中GPR91对Akt磷酸化的影响

为探讨GPR91是否参与心肌细胞损伤的机制，我们选用siRNA技术干扰GPR91的表达，Westernblot法检测干扰效果，可达到50%的抑制率，说明干扰成功，为下游信号分子通路的研究提供了基础。低氧培养小室具有独立、密闭性良好的特点，可直接放入现有实验室的细胞培养箱与其他....

本文编号：4024492