人上皮间质相互作用蛋白1参与白介素28A介导的抗病毒过程

发布时间：2017-06-13 06:00

  本文关键词：人上皮间质相互作用蛋白1参与白介素28A介导的抗病毒过程，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：丙型肝炎病毒(HCV)为单股正链RNA病毒,感染了全世界约1.7亿人,可导致慢性肝炎、肝硬化、肝癌等严重的肝脏疾病。以往的报道已经证实IFN-λs能够在体外抑制HCV的复制,但是关于具体的机制IL-28A是如何进行抗病毒尚未可知,并且IL-28A诱导基因的功能也不是全部都了解的很清楚。在本课题中,我们发现IL-28A可以在全长复制子细胞系和病毒感染肝癌细胞系中抑制HCV复制。可以显著的抑制病毒的复制、组装、释放等生活周期,但对病毒的入侵没有影响。IL-28A和IFN-α诱导基因表达的时间点不同,IFN-α处理较短时间,诱导的基因表达水平就达到顶峰。但IL-28A处理较长时间后,诱导的基因表达水平才达到顶峰。两种干扰素联合使用后,对病毒的抑制水平、STATs蛋白磷酸化水平和激活基因的表达水平都比任何一种干扰素单独使用时高。这些都说明两种干扰素具有协同抗病毒作用。人上皮间质相互作用蛋白1(EPSTI1),是一种IL-28A诱导的干扰素诱导基因,在IL-28A介导的抗病毒活动中起到了非常重要的作用。在没有干扰素处理的情况下,EPSTI1的表达可以抑制病毒的复制,而沉默EPSTI1会促进病毒的增长。并且EPSTI1选择性的抑制HCV的复制,对其它生活周期没有显著影响。EPSTI1能够激活PKR的启动子,并且诱导许多PKR依赖的早期ISGs的表达,如IFN-β、IFIT1、OAS1和RNase L。EPSTI1通过激活PKR依赖的信号途径起到抗病毒的作用。这些结果暗示了在IL-28A的抗病毒过程中EPSTI1主要通过激活PKR依赖的基因起作用。
【关键词】：丙型肝炎病毒 IL-28A 病毒复制 ISG EPSTI1 PKR
【学位授予单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373.21
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第1章 绪论9-14
• 1.1 丙型肝炎病毒概述9-12
• 1.1.1 丙型肝炎病毒9-10
• 1.1.2 HCV病毒的传播10-12
• 1.2 EPSTI1蛋白12-13
• 1.3 本课题研究思路及意义13-14
• 第2章 IL-28A对HCV的生活周期的影响14-28
• 2.1 前言14
• 2.2 实验材料14-15
• 2.2.1 试剂与耗材14
• 2.2.2 仪器与设备14-15
• 2.3 实验方法15-24
• 2.3.1 细胞培养15-17
• 2.3.2 转染sh RNA质粒以及其它质粒17
• 2.3.3 RNA提取17-18
• 2.3.4 逆转录PCR（Invitrogen试剂盒）18-19
• 2.3.5 荧光定量PCR （SYBR Green法）19-20
• 2.3.6 蛋白质的提取20
• 2.3.7 蛋白质浓度的测定（Bio-Rad试剂盒）20
• 2.3.8 蛋白免疫印迹（Western Blot）20-22
• 2.3.9 荧光素酶报告基因检测22-23
• 2.3.10 免疫荧光检测HCV23-24
• 2.4 实验结果24-26
• 2.4.1 IL-28A对HCV复制的影响24
• 2.4.2 IL-28A对HCV其它生活周期的影响24-26
• 2.5 小结与结论26-28
• 第3章 IL-28A和IFN-α 可以协同抑制HCV复制28-37
• 3.1 前言28
• 3.2 实验材料28-29
• 3.2.1 实验试剂与耗材28
• 3.2.2 仪器与设备28-29
• 3.3 试验方法29-34
• 3.3.1 引物设计29-30
• 3.3.2 RNA的提取30-31
• 3.3.3 蛋白质浓度的测定（Bio-Rad 试剂盒）31
• 3.3.4 蛋白免疫印迹（Western Blot）31-33
• 3.3.5 免疫荧光检测 HCV33-34
• 3.4 结果34-36
• 3.4.1 IL-28A和IFN-α 能够联合抗病毒34
• 3.4.2 IL-28A和IFN-α 能够联合增强JAK-STAT信号通路34-35
• 3.4.3 IL-28A和IFN-α 能够联合增强ISGs的表达35-36
• 3.5 小结与讨论36-37
• 第4章 EPSTI1的抗病功能依赖于PKR37-49
• 4.1 前言37
• 4.2 实验材料37-38
• 4.2.1 实验试剂和耗材37
• 4.2.2 实验仪器与设备37-38
• 4.3 实验方法38-43
• 4.3.1 EPSTI1过表达载体质粒的制备38-39
• 4.3.2 特异性EPSTI1-sh RNA的制备39-40
• 4.3.3 转化体系所需40-41
• 4.3.4 连接体系的转化41
• 4.3.5 质粒小提（QIAGEN试剂盒）和鉴定41-42
• 4.3.6 DNA提取42-43
• 4.4 实验结果43-48
• 4.4.1 EPSTI1的抗病毒功能43-45
• 4.4.2 EPSTI1通过PKR信号通路起到抑制HCV复制的作用45-47
• 4.4.3 EPSTI1是通过激活PKR的启动子来提高PKR的表达的47-48
• 4.5 小结与结论48-49
• 结论与展望49-51
• 参考文献51-57
• 附录 攻读硕士学位期间参与发表论文和专利57-58
• 致谢58

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4 林秀云,郑启泰,沈福岭,王琳,赵知中;抗病毒新药酞丁安晶体结构研究[J];科学通报;1988年18期

5 吴章琦;;第四届国际抗病毒会议[J];中国病毒学;1991年04期

6 符立梧;潘启超;;抗病毒药物作用机制研究新进展[J];广东科技;1994年11期

7 Andrew Pollack ,余家驹;“非典”引发的抗病毒竞赛[J];世界科学;2003年07期

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10 宋媛媛;佟泽勇;;有关生物制药领域中抗病毒药物的发展现状[J];黑龙江科技信息;2011年24期

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1 王融冰;孙凤霞;江宇泳;周桂琴;王晓静;司马奋强;;慢性乙型重型肝炎的抗病毒治疗[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年

2 刘涛;张春梅;辛艳春;;慢性乙型病毒性肝炎治疗的再思考:抑制、清除或耐受?[A];中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2013年

3 陈本川;;抗病毒药物研究进展[A];现代科技与湖北新型工业化——第二届湖北科技论坛优秀论文集[C];2003年

4 周黎明;;抗病毒药物研究进展[A];中国药理学会化疗药理专业委员会第九届学术研讨会论文摘要集[C];2008年

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1 本报记者 葛密艳 刘永斌;抗病毒兽药被禁之后[N];河北科技报;2006年

2 王立峰;抗病毒药物市场概况（二）[N];中国高新技术产业导报;2002年

3 记者 孙梦;重点人群应48小时内使用抗病毒药物[N];健康报;2013年

4 记者 伍江 特约通讯员 陈玉川;我市未现抢购抗病毒药物风潮[N];湛江日报;2013年

5 白爱芹 王宗芹;抗病毒药物的研究[N];中国医药报;2003年

6 金山;抗病毒类药市场解密[N];医药经济报;2004年

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8 记者 李颖;抗击慢乙须重视抗病毒[N];科技日报;2012年

9 本报记者 陈国东;抗病毒药物生产提前备战[N];医药经济报;2009年

10 刘士敬;乙肝抗病毒治疗为何难以实施？[N];大众卫生报;2005年

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8 杨旭;鸡肉中多残留检测方法的研究以及金刚烷胺、利巴韦林标准物质的研制[D];福建农林大学;2016年

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