归肾丸对DOR模型小鼠卵巢功能影响的实验研究

发布时间：2017-06-13 21:07

  本文关键词：归肾丸对DOR模型小鼠卵巢功能影响的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过腹腔注射环磷酰胺建立小鼠卵巢功能下降的模型,观察卵巢功能下降的模型小鼠血清AMH、FSH、E2水平影响及卵巢信号通路中GDF-9mRNA、BPM-15mRNA、SCFmRNA的表达,初步探讨归肾丸对改善卵巢储备功能、提高卵泡质量及信号传导中GDF-9、BPM-15、SCF因子的影响;并验证本经方治疗卵巢储备功能下降,卵泡发育障碍所致不孕的有效性,并进一步为归肾丸的中药新药研究开发、以及临床研究提供一定的科学依据。方法:选用周龄为8~10周BALB/c动情周期正常的雌鼠60只。将BALB/c小鼠随机分成六组:正常对照组简称正常组、模型对照组简称模型组、补佳乐组(含戊酸雌二醇片0.01mg/mL)简称西药组、中药高剂量组(含归肾丸1.8g/mL)简称高剂量组、中药中剂量组(含归肾丸0.9g/mL)简称中剂量组、中药低剂量组(含归肾丸0.45g/mL)简称低剂量组,共计六组。除正常组BALB/c小鼠外,其余五组小鼠采用一次性腹腔注射法,以90mg/kg剂量环磷酰胺复制卵巢储备功能下降所致卵泡发育障碍的动物模型。从造模后第二天开始行阴道脱落细胞学涂片观察记载小鼠动情周期变化情况,并且所有BALB/c小鼠持续灌胃30天,每只0.3mL/日/次,其中正常组和模型组用0.9%的生理盐水灌胃。灌胃结束后第2天处死小鼠,分别采用酶联免疫吸附法和化学发光免疫法检测血清雌二醇(E2)、抗苗勒氏管激素(AMH)、促卵泡激素(FSH)水平;采血后将处死的小鼠,摘取双侧卵巢组织,称取卵巢湿重;采用Real-Time PCR检测卵巢组织中的GDF-9mRNA、BPM-15mRNA、SCFmRNA表达水平。结果:1.BALB/c小鼠一般情况比较:正常组小鼠饮食量正常,皮毛干爽光滑,精神状态良好,喜动而不喜卧,大便呈黑色麦粒状。而其它各组小鼠食欲减退,皮毛汗湿竖立稀疏,精神萎靡,弓背萎缩,喜挤卧而不喜动,行动呆滞,呼吸深迟,倦怠嗜睡,消瘦,大便溏,色泽呈浅灰色。与正常组小鼠的卵巢湿重相比,模型组、西药组、中药高、中、低剂量组小鼠的卵巢湿重均无差异性(p0.05)。2.balb/c小鼠动情周期变化:与正常组相比,模型组生殖周期天数明显呈升高趋势,有统计学意义(p0.05)。而模型组balb/c雌鼠的动情周期较正常组相比明显下降,差异均有统计学意义(p≤0.01)说明造模成功。3.对血清amh的影响:与正常组相比,模型组amh的值明显低于正常组(p0.05),具有统计学意义,西药组、中药高、中、低剂量组的血清amh值无差异性(p0.05);与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组amh值均高于模型组(p0.05);与西药组相比,与中药各组amh值均无差异性(p0.05);中药组高、中、低剂量组amh的值同比,中药低剂量组低于中药高、中剂量组,具有明显差异性(p0.05)。4.对血清fsh、e2的影响:与正常组相比,模型组、西药组、中药高、中、低剂量组血清fsh的值升高(p0.05),e2值均降低,其中模型组、中药低剂量组e2值具有统计学意义(p0.05);与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量fsh的值均低于模型组(p0.05),而e2值高于模型组(p0.05);与西药组相比,中药各组fsh、e2的值无差异性(p0.05);中药各组之间同比,中药低剂量组的e2的值低于中药高、中剂量组(p0.05)。5.对卵巢内gdf-9mrna相对表达的影响:与正常组相比,模型组、西药组、中药高、中、低剂量组的gdf-9mrna相对蛋白表达量低于正常组,其中模型组较为显著(p0.01);与模型组相比,西药组、中药高、中剂量组的gdf-9mrna相对蛋白表达量高于模型组(p0.05),与西药组相比,中药各组的gdf-9mrna相对蛋白表达量无明显差异(p0.05);中药各组之间同比,无统计学意义(p0.05)。6.对卵巢内BPM-15mRNA相对表达的影响:与正常组相比,模型组、西药组、中药高、中、低剂量组卵巢中BMP-15mRNA的相对表达均低于正常组,其中模型组与中药低剂量组较为显著(P0.01);与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组卵巢中BMP-15mRNA的相对表达高于模型组,其中西药组、中药高、中剂量组较为显著(P0.01);与西药组相比,中药各组无明显差异(P0.05);与中药各组之间同比,中药高、中剂量组卵巢中BMP-15mRNA的相对表达高于中药低剂量组(P0.01)。7.对卵巢内SCFmRNA相对表达的影响:与正常组相比,模型组、西药组、中药高、中、低剂量组卵巢中SCFmRNA的相对表达均低于正常组,其模型组与中药低剂量组较为显著(P0.05);与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组卵巢中SCFmRNA的相对表达高于模型组,其西药组、中药高、中剂量组具有明显差异性(P0.05);与西药组相比,中药各组卵巢中SCFm RNA的相对表达低于西药组,其中药低剂量组具有明显差异性(P0.05);中药各组之间同比,无明显差异性(P0.05)。结论:1.采用CTX行腹腔一次性注射的方法可复制雌鼠卵巢储备功能下降模型。2.归肾丸可有效提高DOR模型小鼠血清AMH及E2水平、降低血清FSH水平。3.归肾丸可增强卵巢内GDF-9、BPM-15、SCF的mRNA的表达,调整其卵母细胞与颗粒细胞之间的“对话”,启动原始卵泡的发育,提高卵巢储备功能。
【关键词】：归肾丸 卵巢储备功能下降 卵巢功能影响 动物实验
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-14
• 缩略词表14-15
• 前言15-19
• 参考文献18-19
• 第一部分 理论研究19-26
• 一．卵巢储备功能下降的中医诊治研究19-24
• 1. 病因病机19-21
• 2. 中医论治21-24
• 参考文献24-26
• 第二部分 实验研究26-59
• 实验一 DOR模型小鼠的建立26-34
• 1.材料26
• 2.方法26-28
• 3.结果28
• 4.讨论28-31
• 参考文献31-34
• 实验二 归肾丸对模型小鼠卵巢功能的影响34-47
• 1.材料34-36
• 2.方法36-39
• 3.结果39-42
• 4.讨论42-45
• 参考文献45-47
• 实验三 卵巢中GDF-9、BPM-15、SCF的mRNA各组含量的比较47-59
• 1.材料47-48
• 2.方法48-52
• 3.结果52-55
• 4.讨论55-57
• 参考文献57-59
• 第三部分 讨论59-68
• 一. 归肾丸立方依据浅析59
• 二. 归肾丸立方特色浅析59-62
• 三. 归肾丸中的方药浅析62-65
• 参考文献65-68
• 第四部分 结语68-70
• 一. 研究结论68
• 二. 新颖点68-69
• 三. 不足及展望69-70
• 附录 1 文献综述 相关细胞因子维持卵泡静息状态的研究进展70-79
• 参考文献75-79
• 附录 2 BALB/c小鼠的阴道涂片79-80
• 附录 3 HE卵巢组织切片80-81
• 附录 4 在学期间发表论文、科研、交流学习及获奖情况81-82
• 一． 在学校期间发表的论文81
• 二．在学期间参与科研情况81-82
• 致谢82

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本文编号：447590