Dead-box RNA解旋酶DDX25和DDX3X在登革病毒感染中的作用

发布时间：2017-06-21 03:00

  本文关键词：Dead-box RNA解旋酶DDX25和DDX3X在登革病毒感染中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：登革病毒是当今世界分布最广泛的一种虫媒病毒,为单股正链RNA病毒,主要由埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。人类、灵长类动物和蚊虫是登革病毒的天然宿主。人体被登革病毒感染后表现的症状不同,严重的会引发登革出血热和登革休克综合症甚至死亡。据统计,每年大约新增数百万登革病毒感染。由于登革病毒感染的机制仍不明确,各血清型之间抗原性存在交叉、存在抗体依赖的增强作用等,至今仍无安全有效的疫苗可用。含Dead-box结构域的RNA解旋酶DDX家族属于剪接因子2解旋酶超家族的一类,参与了RNA代谢的多种过程。此外,一些Dead-box RNA解旋酶被报道能够参与抗病毒免疫反应。在本研究中,我们采取了RNAi文库筛选的方法,研究40多个Dead-box家族成员在登革病毒感染过程中的作用。我们筛选出DDX3X和DDX25作为研究对象,RNAi结果显示,干扰DDX3X能够促进登革病毒复制,而沉默DDX25能抑制登革病毒复制。为了进一步研究DDX3X的抗病毒作用,我们在HEK293T细胞中过表达DDX3X,进行登革病毒感染实验。结果显示,登革病毒的复制水平显著降低。RNAi和过表达的结果说明DDX3X具有抗登革病毒的功能。进一步研究发现,在登革病毒感染早期,干扰DDX3X,IFN-β的表达水平降低;在登革病毒感染的条件下,过表达DDX3X后,IFN-β的表达水平显著升高。而且DDX3X促进了登革病毒诱导的IRF3的转录活性及磷酸化和二聚化。同时,我们发现DDX3X既促进了RIG-I诱导的NFκB的转录活性,也促进了登革病毒诱导的NFκB的启动子活性。因此,我们得出结论,DDX3X在登革病毒感染的早期通过IRF3和NFκB两条支路促进了IFN-β的产生,抑制了登革病毒的复制。不同于之前的文献报道——DDX25是组织特异性表达的,我们发现DDX25在人体多种组织及细胞系中均表达,而且在细胞质和细胞核中均有分布。上皮细胞感染登革病毒后DDX25的表达量显著升高。沉默DDX25能抑制登革病毒复制,而过表达DDX25,登革病毒的复制水平显著升高。这些结果表明DDX25能够促进病毒复制。而对于具体机制的研究发现,在HEK293T细胞中,干扰DDX25后,IFN-β的表达水平显著升高;过表达DDX25后,IFN-β的表达水平显著降低。DDX25还能抑制Se V,VSV和poly I:C诱导的IFN-β的转录。在IFN-β信号通路中,DDX25抑制由RIG-I,MDA5,MAVS,TBK1,IRF3过表达所诱导的IFN-β的启动子转录活性,与此同时,DDX25也抑制了RIG-I,IKKα和p65亚基过表达所诱导的NFκB的转录活性。因此,我们得出结论,DDX25通过IRF3和NFκB两条支路抑制了IFN-β的产生,促进了登革病毒的复制。本研究首次证实了DDX3X的抗登革病毒功能;同时,也首次发现DDX25能够抑制IFN-β信号通路,进一步丰富了Dead-box家族成员在抗病毒天然免疫中所起到的作用,为抗病毒药物的研究提供了新的靶点。
【关键词】：登革病毒 DDX25 DDX3X IFN-β
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373.33
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-21
• 一、实验材料13-14
• 二、实验方法14-21
• 实验结果21-22
• 第一部分 解旋酶DDX3X抑制登革病毒复制22-29
• 一、登革病毒感染的细胞中DDX3X表达上调22
• 二、DDX3X具有抗登革病毒的作用22-24
• （一）沉默DDX3X基因，登革病毒感染水平升高22-23
• （二）过表达DDX3X，抑制登革病毒感染23-24
• 三、DDX3X影响了IFN-Β 的产生24-26
• （一）干扰DDX3X后，，IFN-β 的表达量在登革病毒感染的早期降低24-25
• （二）过表达 DDX3X， IFN-β 的表达量上升25-26
• 四、DDX3X促进登革病毒诱导的IRF3 和NFΚB的转录活性26-27
• （一）DDX3X促进登革病毒诱导的IRF3 的转录活性26
• （二）DDX3X促进DENV和RIG-I诱导的NFκB的转录活性26-27
• 讨论27-29
• 第二部分 解旋酶DDX25 促进登革病毒复制29-39
• 一、DDX25 在人体各组织中广谱表达29
• 二、细胞中DDX25 的表达水平随登革病毒的感染而增加29-30
• 三、DDX25 能够帮助登革病毒复制30-32
• （一）干扰DDX25 后，登革病毒的感染水平显著降低30-31
• （二）过表达DDX25 后，登革病毒的感染水平显著升高31-32
• 四、DDX25 抑制了IFN-Β 的表达32-37
• （一）干扰DDX25 后， IFN-β 的表达量上升32
• （二）过表达DDX25 后， IFN-β 的表达水平显著降低32-33
• （三）在VSV，Poly I:C和SeV刺激下，DDX25 都能显著抑制IFN-β的启动子活性33-34
• （四）DDX25 能够抑制RLR介导的IFN-β 启动子活性34-35
• （五）DENV感染前后，细胞质和细胞核中DDX25 的含量都增加 2635-37
• 讨论37-39
• 参考文献39-44
• 综述44-56
• 参考文献50-56
• 硕士期间完成的论文56-57
• 致谢57-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Megha Haridas Upadya;Jude Juventus Aweya;Yee-Joo Tan;;Understanding the interaction of hepatitis C virus with host DEAD-box RNA helicases[J];World Journal of Gastroenterology;2014年11期

  本文关键词：Dead-box RNA解旋酶DDX25和DDX3X在登革病毒感染中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：467447