狂犬病病毒CVS-11株全序列测定及其感染性克隆的构建

发布时间：2017-06-21 16:01

  本文关键词：狂犬病病毒CVS-11株全序列测定及其感染性克隆的构建，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】测定狂犬病病毒标准攻击毒CVS-11株全基因组序列,构建CVS-11株全长cDNA感染性克隆。【方法】RT-PCR扩增CVS-11株全基因组得到有重叠的12个片段,分别克隆至平端载体pEASY-Blunt,测定CVS-11株全基因组核苷酸序列。用软件DNAMAN分析CVS-11全序列单一性酶切位点,设计引物,分4段扩增CVS-11全基因组,扩增产物经多步酶切、连接逐步插入至真核表达载体pcDNA3.1,获得全长质粒pcDNA3.1-CVS-11。pcDNA3.1-CVS-11与其辅助质粒pcDNA3.1-N、P、L、G共转染NA细胞,经免疫荧光染色、RT-PCR鉴定,拯救得到重组病毒rCVS-11。【结果】CVS-11全基因组序列由11 927个核苷酸组成,编码5个结构蛋白,结构基因排列同已知的其他狂犬病病毒一致。成功构建了CVS-11全长cDNA重组质粒pcDNA3.1-CVS-11和其辅助质粒pcDNA3.1-N、P、L和G。经共转染,成功拯救了重组病毒rCVS-11。【结论】CVS-11株感染性克隆的构建为从分子水平上进一步研究狂犬病病毒奠定了基础。
【作者单位】： 吉林大学畜牧兽医学院;军事医学科学院军事兽医研究所;吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;
【关键词】： 狂犬病病毒 CVS- 全序列测定 感染性cDNA克隆
【基金】：公益性行业(农业)科研专项(201103032) “十一五”国家科技支撑计划重点项目(2010BAD04B03)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 军事医学科学院军事兽医研究所,3吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122狂犬病病毒(rabies virus)属于弹状病毒科狂犬病病毒属,其基因组大小约12 kb,是单股负链非分节段RNA,编码5个结构蛋白。狂犬病病毒能感染多种动物和人,引起神经性疾病,感染病死率高达100%。标

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