基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法研究

发布时间：2017-06-24 20:05

  本文关键词：基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为了便于新发或罕见病毒性传染病的筛查检测,本研究利用多重置换扩增技术,以负链RNA病毒—发热伴血小板减少综合征病毒和正链RNA病毒—登革病毒为模拟样本探索临床样本中RNA病毒基因组非特异性扩增方法。研究中通过梯度稀释的RNA病毒模拟样本中可能存在的不同丰度的病原体,样本核酸依次加工成单链cDNA、双链cDNA、T4DNA连接酶处理后的双链cDNA以及添加外源辅助RNA后合成并连接的双链cDNA形式,然后进行Phi29DNA聚合酶等温扩增,使用荧光定量PCR方法比较各种方法对RNA病毒核酸扩增的影响。结果显示,对于不同类型的RNA病毒模拟标本,多重置换扩增对于单链及双链cDNA的扩增效果有限,而双链cDNA经DNA连接酶处理后的扩增能达到6×103倍;在cDNA合成过程中加入外源辅助RNA,模拟样本中病毒基因组的扩增可达2×105倍,尤其是对含有低丰度病原体的模拟样本扩增效果的改善更为明显。本研究摸索建立了基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法,能够对样本中低丰度RNA病毒基因组实现有效扩增,可满足开展多种病原体筛查检测的需求。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心
【关键词】： 多重置换扩增 PhiDNA聚合酶 RNA病毒
【基金】：传染病防治重大专项—重大传染病应急处置检测平台(No.2011ZX10004-001,2013ZX10004-001)
【分类号】：R341
【正文快照】： 核酸检测是常用的病毒性传染病实验室诊断方法,多是在一个独立的反应体系中进行源于临床标本的一种或一组相关病毒的核酸扩增检测。但是,在新发或罕见传染病发生时,往往需要进行多个病原体的逐一排查和确定,致使在实际的疾病控制和临床诊断过程中常常面临实际临床样本量不足

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本文编号：479319