人脐带间充质干细胞的原代培养及多向分化潜能的研究

发布时间：2017-06-26 18:10

  本文关键词：人脐带间充质干细胞的原代培养及多向分化潜能的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSC)的体外分离培养鉴定方法及多向分化潜能。方法应用Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法及组织贴块培养法对hUCMSC进行体外培养。在倒置显微镜下观察不同方法获得的hUCMSC的生长特点;台盼蓝法测定细胞传代成活率;采用生长曲线、MTT法测定hUCMSC的增殖、流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化及细胞免疫表型变化;采用相应试剂盒鉴定其向成脂细胞、成骨细胞的分化,采用免疫荧光细胞化学技术检测向成心肌样细胞的分化、采用荧光标记技术检测hUCMSC向血管内皮细胞的分化。结果酶消化法分离培养的细胞1 d后,在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈圆形生长,4 d后生长迅速呈长梭形,7 d后由中心向周围生长且增殖明显,10 d后达80%融合即可传代;贴块法培养的细胞7 d后,可见细胞从组织块边缘长出,10 d后细胞数量逐渐增多,16 d后细胞生长迅速呈单层致密排列即可传代,细胞传代成活率均为96%以上。2种方法获得的第3代细胞生长曲线近似"S"形、MTT法显示3~5 d细胞增殖较明显;酶消化法培养的细胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分别为88.78%和10.21%,组织贴块法培养的细胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分别为84.82%和13.87%,细胞DNA周期无明显差异;2种方法获得的细胞经FCM检测CD90、CD105、CD73阳性率均为99%以上为高表达;CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19、HLA-DR低表达;2种方法获得的细胞在体外诱导都能向成骨细胞、成脂细胞、成心肌样细胞及血管内皮细胞分化,其诱导阳性率均为90%以上。结论酶消化法和贴块法均可高效获得hUCMSC,与贴块法培养相比较,酶消化法能更有效的获得扩增迅速、细胞成分单一的细胞。
【作者单位】： 首都医科大学附属北京安贞医院;北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室;北京市心肺血管疾病研究所实验中心;首都医科大学附属北京安贞医院心外科;
【关键词】： 人脐带间充质干细胞 原代培养 诱导分化
【基金】：国家自然科学基金(81070077) 省部共建重点教育部心血管重塑相关疾病重点实验室项目(110267) 北京市优秀人才培养资助项目(2012D003034000009) 北京市自然科学基金(7072012)
【分类号】：R329
【正文快照】： 间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSC)来源于发育早期中胚层,广泛存在于骨髓、脂肪、脐血等多种组织中[1-2],具有自我更新,高度增殖及多向分化潜能的成体干细胞[3-4],MSC逐渐成为替代治疗和基因治疗领域中极具实用价值的细胞来源,在组织工程领域具有广阔的应用前景。近年

【参考文献】

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本文编号：487088