BMP-2诱导人跟腱来源肌腱干细胞成软骨分化的实验研究

发布时间：2017-06-29 14:15

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【摘要】：目的探讨BMP-2体外诱导人跟腱来源肌腱干细胞(human Achilles tendon-derived stem cells,hATDSCs)成软骨分化的作用。方法无菌条件下取急性跟腱断裂患者自愿捐赠的跟腱组织,胶原酶消化获得有核细胞;以500个/cm2细胞密度接种,细胞贴壁呈克隆样生长,混合培养获得原代hATDSCs;体外传代培养至第3代,流式细胞仪检测hATDSCs免疫表型;油红O染色、茜素红染色及番红O/快绿染色分别鉴定hATDSCs成脂、成骨及成软骨分化能力。取第3代细胞体外三维培养成微球后分为两组,实验组用重组人BMP-2(recombinant human BMP-2,rhBMP-2)干预,对照组不进行干预。3周后行微球大体观察;组织学切片行HE染色、番红O/快绿染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察;实时荧光定量PCR检测成软骨特异性基因SOX9、Ⅱ型胶原和软骨聚集蛋白多糖(Aggrecan)表达。结果原代hATDSCs体外培养呈克隆样集落生长;传代后以纺锤形、成纤维样细胞生长,形态均一。hATDSCs阳性表达MSCs特异性表面标志CD44、CD90、CD105,阴性表达CD34、CD45和CD146。多向分化潜能鉴定示hATDSCs成脂诱导3周油红O染色阳性,成骨诱导4周茜素红染色阳性,成软骨诱导3周番红O/快绿染色阳性。rhBMP-2诱导hATDSCs 3周,实验组微球形成,体积显著大于对照组;HE染色、番红O/快绿染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性,实时荧光定量PCR检测示SOX9、Ⅱ型胶原和Aggrecan mRNA表达显著高于对照组(P0.05)。结论体外BMP-2可促进hATDSCs成软骨分化和蛋白聚糖合成增加,为研究慢性腱病组织病理学变化提供细胞生物学依据。
【作者单位】： 东南大学附属中大医院骨科;东南大学医学院;通辽市科尔沁第一人民医院骨科;
【关键词】： 肌腱干细胞 成软骨分化 慢性腱病 BMP-
【基金】：国家自然科学基金青年基金项目(81201422) 江苏省自然科学基金青年基金项目(BK2012334) 东南大学基本科研业务费“创新基金”项目(3290002401) 国家大学生创新训练计划(1210286090) 中国博士后科学基金项目(2012M520983) 江苏省博士后科学基金特别资助项目~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 慢性腱病是运动系统最常见的软组织退行性病变,好发于精英运动员[1]。目前对于慢性腱病的治疗方法有限,疗效不明确[2],这与对该病病理机制缺乏深入了解有关。慢性腱病典型的组织学表现为肌腱愈合失败,可见蛋白聚糖沉积导致基质紊乱、基质金属蛋白酶及组织抑制金属蛋白酶表达改

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本文编号：498186