副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及其活性分析

发布时间：2017-06-29 22:16

  本文关键词：副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及其活性分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的制备副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取副溶血性弧菌ATCC 17802菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水,纯化后得到抗体。结果获得6株持续、稳定分泌抗副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VpNo.1～VpNo.6,抗体效价高达1∶2×106。对抗体进行了Ig类和亚类检测以及Western blot法鉴定,其Ig亚类依次为IgG1、IgG1、IgM、IgG1、IgG2a和IgM。SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为42 000并且纯度较高。采用VpNo.6抗体建立了副溶血性弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,通过采用134株副溶血性弧菌和74株非副溶血性弧菌进行特异性实验,结果表明134株副溶血性弧菌呈阳性反应,74株非副溶血性弧菌呈阴性反应,VpNo.6抗体具有非常好的特异性。在基质添加试验中,最低检出限为21 CFU/g样品。结论成功制备了副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103CFU/mL菌液,与所测试的非副溶血性弧菌没有交叉反应。
【作者单位】： 北京出入境检验检疫局;北京农学院;北京大学实验动物中心;
【关键词】： 副溶血性弧菌 鞭毛蛋白 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
【基金】：质检总局公益项目(201110034) 国家质检总局科技计划项目(2009IK184)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： )副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一种重要的食源性致病菌,分布在世界各地,通常存在于海水浮游生物和鱼贝类中,人们多因食用污染本菌而又未经良好加工的海产品而引起食物中毒,症状为腹泻、肠痉挛、呕吐等,重症患者还会脱水、休克昏迷,甚至死亡[1-2]。目前,副溶血

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 陈钢;赖卫华;段霞;;单增李斯特菌鞭毛蛋白提取方法的研究[J];食品科学;2009年23期

2 李琦,朱勇,贾卫,刘雪松,欧阳为明,金伯泉;抗FITC单克隆抗体的制备及初步应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2003年02期

3 刘秀梅;食源性疾病监控技术的研究[J];中国食品卫生杂志;2004年01期

4 张俊彦;梅玲玲;朱敏;张严峻;潘雪霞;石雅素;郑官增;;301份海水产品副溶血性弧菌定量检测分析[J];中国卫生检验杂志;2007年03期

5 齐小保;熊燕;陈智;周俊英;;武汉市6起食物中毒副溶血弧菌分子特征研究[J];中国卫生检验杂志;2008年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 牛永东,许丽艳,李恩民;酵母单杂交诱饵质粒pHis-3NF和pLacZ-3NF的构建与鉴定[J];癌变.畸变.突变;2003年01期

2 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期

3 李涛,石年,吴又桐,周丽,董洁,王素青,陈亮;Bcl-2在溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡机制中的作用[J];癌变.畸变.突变;2004年05期

4 史冬燕;程在全;;元江普通野生稻金属硫蛋白基因的获得和序列分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2009年03期

5 鞠玉栋;郑回勇;吴维坚;陈永快;何炎森;吴松海;;中国水仙MADS-box基因克隆及其序列分析[J];安徽农学通报;2008年21期

6 张金洲;项智锋;王清华;李学斌;赵海涛;张廷虎;郭玉娇;;利用RAPD标签分析3种鲤科鱼群体的遗传变异[J];安徽农业科学;2008年23期

7 曾青兰;;纤维素降解细菌的分离鉴定和筛选方法的研究[J];安徽农业科学;2008年24期

8 王延云;;峨边花牛肌肉生长抑制素基因cDNA克隆及序列分析[J];安徽农业科学;2008年25期

9 卢高峰;夏平安;邱璜;李伟娟;王中明;刘明莉;;PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因的克隆及表达载体的构建[J];安徽农业科学;2008年26期

10 程宝艳;余为一;彭明义;程帮照;戴银;陈芳芳;;鸡新城疫病毒F基因部分片段克隆表达及其抗体制备[J];安徽农业科学;2008年29期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 田永强;张荣意;朱中元;;人乳头瘤病毒线性平行杂交分型检测条件的建立及优化[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年

2 何丽斌;周宸;林克冰;;几种养殖贝类中副溶血弧菌的分离与鉴定[A];第三届全国现代生态渔业管理与技术研究[C];2011年

3 梁权;毛培菊;罗春贞;王缦;;HIV-1跨膜蛋白gp41的截短表达及其免疫反应性[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

4 朱勤勋;严雪;韩友斌;;鼠源IgG抗体F(ab')2片段及Fab片段的制备纯化及其免疫活性研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

5 朱美财;占志;王雅静;蔡庆;;刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中的表达及在TPA纯化中的应用[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年

6 刘俊莹;张华鹏;王聪聪;张剑峰;;马铃薯卷叶病毒ORF1克隆及序列分析[A];马铃薯产业与科技扶贫（2011）[C];2011年

7 冯琦;孙秉中;赵永同;孙凯;张英起;颜真;韩苇;;Bcr-abl特异性系列核酶载体的构建及初步鉴定[A];生命科学与生物技术：中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年

8 白玉杰;苏成芳;杨安刚;;抗人CD3单链抗体基因的构建及表达[A];生命科学与生物技术：中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年

9 赵洁;刘楚吾;;笛鲷AFLP分析体系的确立[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会（第三卷）[C];2010年

10 马艳芝;张玉星;;梨属植物基因组DNA提取部位对RAPD扩增的影响[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王庆莲;苹果多胺和脯氨酸合成代谢相关基因的功能鉴定[D];山东农业大学;2009年

2 郭爱疆;猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原表位及组织定位的研究[D];甘肃农业大学;2010年

3 郑小坚;家蚕类胰岛素基因BBX-B8的功能研究[D];苏州大学;2010年

4 王发明;柚（citrus grandis Osbeck）单染色体AFLP分子标记体系及文库的建立[D];福建农林大学;2010年

5 于蕾;野西瓜极性生物碱A10组分诱导SGC-7901细胞凋亡线粒体通路的研究[D];北京中医药大学;2010年

6 王欣梅;大肠杆菌f2噬菌体分子印迹膜的制备、评价和应用[D];华中科技大学;2011年

7 赵雪倩;维甲酸相关孤核受体α在α-黑素细胞刺激素及其类似物STY39调控树突状细胞成熟中的作用[D];第二军医大学;2011年

8 张荻;百子莲花芽分化及开花机理研究[D];东北林业大学;2011年

9 罗其花;中国小蜂螨自然种系构成、流行病学调查及寄生生物学研究[D];中国农业科学院;2011年

10 李广平;藏族原发性高血压的遗传学基础[D];北京协和医学院;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 傅宜方;梁春霞;卢国钧;易洪;;广州市售熟肉制品单核细胞增生李斯特菌污染状况调查及前增菌方法运用效果观察[J];华南预防医学;2008年01期

2 陈萍;;南平市2007年食品污染物检测微生物指标结果分析[J];海峡预防医学杂志;2009年02期

3 尹本康;梁柏年;李占裕;陈子慧;朱小慧;;江门市区食品中单增李斯特菌污染及耐药状况调查[J];疾病监测;2007年05期

4 陈瑞英;鲁建章;苏意诚;刘承初;;食品中副溶血性弧菌的危害分析、检测与预防控制[J];食品科学;2007年01期

5 郑华英,龙一兵;食品安全与食源性疾病的控制[J];中国卫生监督杂志;2002年01期

6 刘秀梅,陈艳,王晓英,计融;1992～2001年食源性疾病暴发资料分析——国家食源性疾病监测网[J];卫生研究;2004年06期

7 王海艳;刘中学;石新华;赵林立;刘虹;甄宏太;;单增李斯特菌及其表面蛋白的研究进展[J];检验检疫科学;2006年02期

8 张蔚;潘劲草;孟冬梅;陈坤;;杭州地区2000-2002年副溶血弧菌的分子分型研究[J];中华流行病学杂志;2006年04期

9 蔡潭溪,蒋鲁岩,黄克和;副溶血弧菌的分子生物学研究进展[J];中国人兽共患病杂志;2005年10期

10 刘秀梅,程苏云,陈艳,袁宝君,戴建华,马群飞,戴昌芳,严纪文;2003年中国部分沿海地区零售海产品中副溶血性弧菌污染状况的主动监测[J];中国食品卫生杂志;2005年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郝琴;曹伯良;侯学霞;耿震;万康林;;中国莱姆病螺旋体特异性单克隆抗体的制备及初步鉴定[J];中国人兽共患病学报;2008年05期

2 焦新安,张国强,文其乙,高崧,吴长新,张如宽,刘秀梵;鞭毛蛋白属共同抗原表位在沙门氏菌分类中的作用探讨[J];中华微生物学和免疫学杂志;1997年02期

3 吕冰,万康林;中国莱姆病螺旋体鞭毛蛋白中央区的基因克隆和表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;2004年08期

4 吕冰,万康林,侯学霞,郝琴,耿震;中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体PD91鞭毛蛋白的基因克隆和表达[J];中华流行病学杂志;2004年09期

5 胡明冬,徐剑铖,冯英凯,周长喜,龚传明;甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白的分离纯化及其抗血清的制备[J];第三军医大学学报;2005年07期

6 李新军,张启恩,张泮河,戴小红,张习坦;伯氏疏螺旋体鞭毛蛋白特异性区段的基因克隆和表达[J];中国人兽共患病杂志;1999年04期

7 刘李;段永翔;许欣;;副溶血性弧菌分子分型技术研究进展[J];现代预防医学;2010年04期

8 徐薇;;Toll样受体5介导抗菌鞭毛蛋白的天然免疫[J];国外医学(微生物学分册);2002年02期

9 兰英华;;沙门菌鞭毛蛋白的研究进展[J];国外医学(微生物学分册);2002年05期

10 胡玉山;王鸣;杜琳;江丽芳;邓志爱;刘俊华;候水平;林云万;莫自耀;;副溶血性弧菌流行群特异多重PCR鉴定[J];中国公共卫生;2007年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年

2 李丹丹;张小莺;;猪戊型肝炎病毒重组蛋白ORF2-V1单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年

3 夏立新;Robotham Teuber Sathe Roux;;利用单克隆抗体鉴定腰果主要过敏原Ana o 2的一个IgE立体抗原表位[A];中华医学会2009年全国变态反应学术会议论文汇编[C];2009年

4 马翠卿;郭奕阳;顾海燕;曾瑞红;杨丽娟;魏林;;一株抗A族链球菌表面蛋白Fba的单克隆抗体对应的表位与Fba结合调节蛋白FH的位点重叠[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年

5 杜雪梅;唐丽;任飞W，

本文编号：499558