带有Flag标签的ZNF580真核表达载体的构建及扩增

发布时间：2017-06-29 23:07

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【摘要】：目的构建并扩增带有Flag标签的ZNF580真核表达载体,用于免疫共沉淀实验。方法 pGB-ZNF580质粒进行SfiI酶切,琼脂糖电泳,切胶并纯化回收ZNF580片段,与同样酶切的真核表达载体pCDEF-Flag连接构建重组质粒pCDEF-Flag-ZNF580。重组质粒转化细菌感受态,铺于氨苄抗性LB平板,37℃培养箱过夜,挑取转化了重组质粒的单克隆接种于液体LB培养基中摇床培养4～8 h。从大肠杆菌中提取质粒酶切鉴定及送Takara公司测序鉴定。结果成功构建重组质粒pCDEF-Flag-ZNF580并转化细菌感受态,于大肠杆菌中扩增得到足够用于细胞转染和免疫共沉淀实验的重组质粒,Takara测序结果显示重组质粒序列完全正确。结论成功构建和扩增了重组质粒pCDEF-Flag-ZNF580,为后续进行真核细胞的转染及免疫共沉淀实验奠定了基础。
【作者单位】： 中国人民武装警察部队后勤学院生理学与病理生理学教研室;
【关键词】： ZNF 转录因子 真核表达载体
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81170106) 天津市自然科学基金(10JCYBJC26500) 武警后勤学院面上项目(WYM2010-5)
【分类号】：R341
【正文快照】： 人ZNF580基因是本课题组以致动脉粥样硬化因素-低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞,采用差异显示逆转录PCR技术分析得到的一个新基因(Genbank注册号:AF184939)。其cDNA编码的蛋白属于C2H2型锌指核转录因子家族的新成员〔1,2〕。前期研究显示:ZNF580在人体多种组织均有表达,可能

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本文编号：499650