单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录本开放读码框的表达及其抗凋亡功能分析

发布时间：2017-06-30 11:04

  本文关键词：单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录本开放读码框的表达及其抗凋亡功能分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体(LAT)开放读码框(ORF)对凋亡诱导剂诱导Vero细胞凋亡的影响。方法:PCR扩增LAT ORF1、ORF2、ORF3片段,构建重组质粒pEGFPORF1、pEGFP-ORF2、pEGFP-ORF3,重组质粒pEGFP-ORF1、pEGFP-ORF2、pEGFP-ORF3转染Vero细胞;RT-PCR鉴定ORF1、ORF2、ORF3的表达。用凋亡诱导剂放线菌素D、顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导Vero细胞凋亡,通过荧光显微镜观察细胞形态学的改变,MTT检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:双酶切和测序确认pEGFP-ORF1、pEGFP-ORF2、pEGFP-ORF3构建成功,RT-PCR表明这3个真核表达载体能在Vero细胞中高效表达。转染各种pEGFP-ORF的Vero细胞经凋亡诱导剂诱导后,细胞形态正常。MTT结果表明转染了各种重组质粒pEGFP-ORF的Vero细胞经凋亡诱导剂诱导后Vero细胞活性与未经任何处理的正常对照组相比,差异无统计学意义(P0.05),但高于凋亡诱导剂诱导凋亡的Vero细胞组及与转染空质粒pEGFP-C2,且经凋亡诱导剂诱导的Vero细胞组,差异具有统计学意义(P0.05)。流式细胞术结果表明,转染各种重组质粒pEGFP-ORF且经凋亡诱导剂诱导凋亡组与正常对照组凋亡率差异无统计学意义(P0.05),而显著低于转染空质粒pEGFP-C2且经凋亡诱导剂诱导凋亡组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HSV-2 LAT ORF对凋亡诱导剂诱导的Vero细胞的凋亡具有抵抗作用。
【作者单位】： 广州军区广州总医院;华南理工大学生物科学与工程学院;
【关键词】： 单纯疱疹病毒 LAT ORFs 凋亡诱导剂 凋亡 Vero细胞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30972666,81071401,81171511)
【分类号】：R373
【正文快照】： 单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是人类常见病毒性疾病的病原体,初次感染后,疱疹病毒会潜伏在人体神经节中,各种非特异条件刺激下病毒会被激活,引起复发感染并出现相应的临床症状。疱疹病毒潜伏感染和再激活的机制还不是十分清楚,临床上尚无有效的抗病毒药物可以彻底

【共引文献】

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本文编号：501649