应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库

发布时间：2017-07-04 08:22

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【摘要】：目的应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库。方法采集登革确诊患者恢复期外周血,分离外周血淋巴细胞并提取其总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库;将抗体基因库转染CHO细胞、用流式细胞仪分析抗体在CHO细胞表面的表达。结果以1.2μg总RNA为模板,用6套引物扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,轻链基因库容量为1.45×104,重链基因库容量为1.8×105;随机挑选的10个轻链克隆和10个重链克隆,经过测序鉴定,轻链有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,重链有7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析含有正确阅读框架的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达,抗体库中可表达的抗体多样性达到109。结论以1.2μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建可表达库容量达到109的登革病毒特异性全长人抗体基因库。
【作者单位】： 南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系;南方医科大学南方医院;广州市第八人民医院感染科;南方医科大学中医药学院;杭州环捷科技有限公司;
【关键词】： 登革病毒 哺乳动物细胞表面展示 全长人源抗体库
【基金】：广东省自然科学基金(S2011010003912) 南方医科大学公卫学院院长基金(GW201248) 杭州环捷科技有限公司科研基金
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 登革病毒(DENV)属于黄病毒科黄病毒属,临床上可引起登革热(DF)、登革出血热(DHF)和登革休克综合征(DSS)[1]。由于全球气候变暖、国际旅游频繁和对蚊虫缺乏有效的控制,全世界有25亿人正受到感染登革病毒的威胁,是较为严重的公共卫生问题。由于其发病机制至今尚未清楚并且缺乏

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本文编号：517074