转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体

发布时间：2017-07-06 12:15

  本文关键词：转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体

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【摘要】：目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PCR等方法获取TCR的α和β链编码基因;构建TCR重组逆转录病毒,介导特异性TCR分别在人Jurkat T细胞和HLA-A2阳性健康人CD8 T淋巴细胞上表达。结果从1例HLA-A2阳性急性乙肝患者样本中分别获得了2组TCR Vα、Vβ配对,分别命名为α21β13、α15β13,包装的重组逆转录病毒滴度为(1.5～5.0)×105IU/mL,用针对目标TCR的特异性Vβ链抗体(抗Vβ13 TCR-PE)和HLA-A2限制性表位特异性五聚体(pentamer)进行免疫荧光染色,重组TCR在T细胞表面获得表达:其中在Jurkat细胞上转入的Vβ13链表达细胞占1.06%～2.25%,在HLA-A2阳性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞分别占到1.03%～2.06%和1.05%～1.12%,在HLA-A2阴性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞均低于0.05%。结论通过逆转录病毒介导可以使HBV特异性CTL TCR获得转基因表达,具有结合HLA-A2限制性表位的活性。
【作者单位】： 桂林医学院;解放军302医院全军传染病研究所肝衰竭研究中心病毒性肝炎研究室;桂林市第三人民医院肝病科;
【关键词】： 乙型肝炎病毒 细胞毒性T淋巴细胞 T细胞受体 表位特异性 表达
【基金】：国家自然科学基金(30771898) 军队“十一五”医药卫生科研杰出人才项目(06J024)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 肝细胞内乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)清除主要依靠HBV抗原表位特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)的作用[1],急性乙肝患者可以产生较强的CTL反应,慢性乙型肝炎患者的外周血中往往CTL反应很弱,且针对的病毒抗原表位反应单一,导致不能完全清除HBV[2

【共引文献】

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本文编号：526187