人血管内皮生长因子165基因慢病毒载体的构建及其在人胚胎神经干细胞中的表达

发布时间：2017-07-06 14:05

  本文关键词：人血管内皮生长因子165基因慢病毒载体的构建及其在人胚胎神经干细胞中的表达

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【摘要】：目的:构建携带人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因的慢病毒表达载体,转染人胚胎神经干细胞(hNSCs)并检测hVEGF165基因在hNSCs内的表达。方法:用RT-PCR法扩增出hVEGF165 cDNA,插入pCDH-CMV-copGFP慢病毒载体中,构建pCDH-hVEGF165慢病毒表达载体,双酶切和测序鉴定,包装并转染hNSCs。荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达,流式细胞术(FCM)测定转染率,Western blot法检测细胞中hVEGF165的表达。结果:酶切及测序结果显示成功构建pCDH-hVEGF165重组慢病毒表达载体,转染7d后观察宿主细胞内有大量GFP表达,FCM测定转染率为63%,Western blot检测证实hVEGF165蛋白在hNSCs中过表达。结论:本实验成功构建了携带hVEGF165的慢病毒表达载体,并在hNSCs中过表达hVEGF165基因。
【作者单位】： 温州医学院附属第一医院神经外科;
【关键词】： 血管内皮生长因子类 慢病毒载体 神经干细胞 转染
【基金】：浙江省自然科学基金项目(编号:Y2110807)
【分类号】：R329
【正文快照】： 神经干细胞具有自我更新和多向分化潜能,是理想的供移植细胞和基因治疗载体。神经干细胞能部分修复因脑出血引起的神经结构和功能损害。但单纯的神经干细胞移植并不能对脑出血早期局部病理改变产生积极影响[1]。本研究将携带人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因的慢病毒载体

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