血管内皮前体细胞对间充质干细胞分化潜能的影响

发布时间：2017-07-15 11:00

  本文关键词：血管内皮前体细胞对间充质干细胞分化潜能的影响

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【摘要】：目的1.探讨血管内皮前体细胞(EPC)对间充质干细胞(MSC)成骨分化的影响以及机制。2.探讨EPC对MSC成软骨分化的影响。方法1.利用全骨髓贴壁法从C57BL/6小鼠骨髓内分离MSC,流式细胞术检测第三代细胞表面分子表达情况;成骨、成软骨诱导检测其分化能力。2.利用差速贴壁法分离EPC,通过流式细胞术检测第三代细胞表面分子,进一步采用体外管腔结构形成实验对其功能进行鉴定。3.茜素红染色检测MSC/EPC共培养、不同浓度的血管内皮前体细胞条件培养基下(EPC-CM)对MSC成骨分化的影响。4.提取血管内皮前体细胞的条件培养基并用ELISA检测VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF的含量。5.在50%EPC-CM基础上,分别加入上述6个细胞因子的中和抗体,茜素红染色检测EPC-CM中参与促进间充质细胞成骨分化的细胞因子。6.阿利辛蓝染色检测MSC/EPC共培养、不同浓度的EPC-CM对MSC成软骨分化的影响。结果1.体外分离培养的MSC表达间充质细胞表面标记物,几乎不表达造血系细胞的标志物,具备成骨、成软骨分化能力。2.利用差速贴壁法所得的血管内皮前体细胞同时表达造血细胞和内皮细胞的标记物,并且能在基质胶上形成管腔样结构。3.MSC/EPC组矿化结节形成明显多于MSC组,钙盐半定量检测示MSC/EPC组OD值大于MSC组OD值,统计学分析P0.001;50%EPC-CM组矿化结节形成多于25%EPC-CM组,25%EPC-CM组多于0%EPC-CM组;半定量分析50%EPC-CM组OD值大于25%EPC-CM组OD值(P0.01),25%EPC-CM组OD值大于0%EPC-CM组OD值(P0.01)。4.EPC分泌VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF。5.在50%EPC-CM下,加入VEGF、TGFβ1、IGF-1抗体的三组矿化钙结节数量相对于对照组明显减少,有统计学意义(P0.01)。6.MSC/EPC组的糖胺聚糖沉积量明显多于MSC组(P0.001);糖胺聚糖沉积量在50%EPC-CM组、25%EPC-CM组、0%EPC-CM组无差异(P0.05)。结论1.血管内皮前体细胞或许是通过其分泌的VEGF、TGFβ1、IGF-1促进间充质干细胞成骨分化。2.在体外血管内皮前体细胞通过直接接触促进间充质干细胞成软骨分化。
【关键词】：间充质干细胞 血管内皮前体细胞 共培养 血管内皮生长因子 胰岛素样生长因子1 转化生长因子1
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 缩略语表11-12
• 前言12-14
• 第一部分：C57BL/6 小鼠骨髓间充质干细胞、血管内皮前体细胞的分离、扩增与鉴定14-24
• 实验一：C57BL/6 小鼠骨髓间充质干细胞的分离、扩增与鉴定14-19
• 1 材料14-15
• 1.1 主要仪器和试剂14-15
• 1.2 实验动物15
• 1.3 主要溶液的配置15
• 2 方法15-16
• 2.1 小鼠MSC的分离与培养15-16
• 2.2 流式细胞术检测小鼠MSC表面标记物16
• 2.3 小鼠MSC成骨分化鉴定16
• 2.4 小鼠MSC成软骨分化鉴定16
• 3 结果16-18
• 3.1 MSC的形态学特征16-17
• 3.2 MSC的免疫表型17
• 3.3 MSC的成骨、成软骨分化17-18
• 4 讨论18-19
• 实验二：C57BL/6 小鼠血管内皮前体细胞的分离、扩增与鉴定19-24
• 1 材料19-20
• 1.1 主要仪器和试剂19-20
• 1.2 实验动物20
• 2 方法20-21
• 2.1 C57BL/6 小鼠血管内皮前体细胞的分离与培养20
• 2.2 流式细胞术检测EPC表面标记物20
• 2.3 管腔结构形成试验20-21
• 3 结果21-22
• 3.1 血管内皮前体细胞的形态学特征21
• 3.2 第三代血管内皮前体细胞的表型特征21-22
• 3.3 第三代血管内皮前体细胞在基质胶上形成管腔结构22
• 4 讨论22-24
• 第二部分：血管内皮前体细胞对间充质干细胞成骨分化的影响24-37
• 1 材料24-25
• 1.1 主要仪器和试剂24
• 1.2 实验动物24
• 1.3 主要溶液的配置24-25
• 2 方法25-29
• 2.1 C57BL/6 小鼠MSC、EPC的分离、培养与鉴定25
• 2.2 EPC/MSC共培养对MSC成骨分化的影响25
• 2.3 EPC条件性培养基（EPC-CM）的提取25
• 2.4 EPC-CM对MSC成骨分化的影响25
• 2.5 ELISA法检测EPC-CM中VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF含量25-29
• 2.6 探索EPC-CM中促进MSC成骨分化的细胞因子29
• 2.7 检测MSC表面表达VRGFR2情况29
• 2.8 统计学方法29
• 3 结果29-35
• 3.1 MSC/EPC共培养促进MSC成骨分化29-30
• 3.2 EPC-CM促进MSC成骨分化30-31
• 3.3 EPC分泌VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF31-32
• 3.4 VEGF、TGFβ1、IGF-1 参与EPC促进MSC成骨分化32-34
• 3.5 MSC表达VEGFR234-35
• 4 讨论35-37
• 第三部分：血管内皮前体细胞对间充质干细胞成软骨分化的影响37-42
• 1 材料37
• 1.1 主要仪器和试剂37
• 1.2 实验动物37
• 1.3 主要溶液的配置37
• 2 方法37-38
• 2.1 C57BL/6 小鼠MSCs、EPCs的分离、培养与鉴定37
• 2.2 EPCs/MSCs共培养对MSCs成软骨分化的影响37
• 2.3 EPC条件性培养基（EPC-CM）的提取37-38
• 2.4 EPC-CM对MSC成骨分化的影响38
• 2.5 统计学方法38
• 3 结果38-40
• 3.1 MSC/EPC共培养促进MSC成软骨分化38-39
• 3.2 EPC-CM对MSC成软骨分化无影响39-40
• 4 讨论40-42
• 结论42-43
• 参考文献43-49
• 文献综述49-57
• 参考文献53-57
• 致谢57-58
• 作者简介58-59
• 导师评阅表59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 俞猛;徐万鹏;于方;付胜良;;TGF-β_1和bFGF对骨髓基质干细胞增殖、分化的影响[J];中国骨肿瘤骨病;2006年06期

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3 刘丹平,宋耀滨,关振家,胡蕴玉;体外培养bFGF,PDGF,TGF-β对兔MSC的ALP活性和增殖的影响[J];锦州医学院学报;2003年01期

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本文编号：543512