小鼠β-防御素3的原核表达、表达条件优化及其抗菌活性

发布时间：2017-07-16 11:02

  本文关键词：小鼠β-防御素3的原核表达、表达条件优化及其抗菌活性

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【摘要】：目的运用基因工程方法获得重组小鼠β-防御素3(MBD3),优化表达条件,并研究其抗菌活性。方法通过反转录PCR方法从小鼠肺组织中扩增Mbd3基因,构建其原核表达质粒,将该质粒转入大肠埃希菌表达菌株Rosetta-gami(2)。优化融合蛋白的表达条件。通过亲和层析、凝血酶酶切、超滤浓缩得到MBD3的重组成熟肽(rMBD3),并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和Western blot鉴定其正确性。采用微量液体抗菌实验检测rMBD3对多种常见病原性细菌和真菌的抗菌活性。结果获得表达MBD3融合蛋白(fMBD3)的工程菌,fMBD3的表达量可达菌体总蛋白的62.9%,可溶性fMBD3约为1.15g/L。纯化的rMBD3对单细胞真菌和革兰阳性菌显示出较好的抑菌活性。结论 rMBD3具有一定的抗菌活性,为进一步研究该多肽的其他生物学活性及其应用提供参考依据。
【作者单位】： 贵阳医学院微生物学教研室;四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室;
【关键词】： 小鼠β-防御素 原核表达
【基金】：贵州省科技厅联合基金项目[黔科合(2010)3143]
【分类号】：R392
【正文快照】： 防御素属于抗微生物肽家族,其特征为小分子阳离子短肽,富含β片层折叠,有6个半胱氨酸形成的3个链内二硫键。根据在半胱氨酸残基间二硫键连接的位置不同,可以将防御素分为α、β和θ三个亚家族。其中,β-防御素以结构性表达或诱导性表达方式存在于机体表皮和黏膜组织内,发挥着

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 江滟;王保宁;杨晓芳;李婉宜;刘冯欢;蒋忠华;李明远;;小鼠β防御素3在大肠杆菌中的融合表达及其抗菌作用的初步研究[J];西部医学;2009年07期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李囡;范红;;侵袭性真菌感染的流行现状及快速分子检测技术[J];四川医学;2008年03期

2 郭普;;医院感染病原菌分布及耐药分析[J];中华医院感染学杂志;2008年03期

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本文编号：548319