Smoothened慢病毒干扰载体的构建及其对人牙周膜干细胞增殖与分化的影响

发布时间：2017-07-27 06:00

  本文关键词：Smoothened慢病毒干扰载体的构建及其对人牙周膜干细胞增殖与分化的影响

  更多相关文章： Smoothened RNA干扰 慢病毒 人牙周膜干细胞

【摘要】：目的体外构建及筛选人Smoothened(SMO)基因的慢病毒干扰载体,使用此载体下调人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,PDLSCs)中SMO基因表达并检测其对细胞增殖与分化的影响。方法针对人SMO基因设计3条干扰序列,构建RNA干扰慢病毒载体,在293FT细胞中包装病毒液并转染293A细胞,通过实时荧光定量PCR检测干扰效率,得到具有最佳干扰效率的病毒后,转染PDLSCs,用Western blot检测其对PDLSCs中SMO基因的干扰效果及对细胞分化的影响,CCK-8法检测其对PDLSCs增殖的影响。结果成功构建3个SMO慢病毒干扰载体(pGP-SMO1、pGP-SMO2、pGP-SMO3),通过转染293A细胞并进行实时荧光定量PCR检测后,得到pGP-SMO1具有最佳干扰效率,转染后SMO mRNA水平下降到对照的(28.5±2.5)%。利用此病毒能够很好地转染体外培养的PDLSCs,并使PDLSCs中SMO蛋白水平下降80%。进一步检测细胞增殖发现,与未转染组比较,SMO下调后PDLSCs增殖变慢[(1.09±0.20)vs(1.86±0.21),P0.01]。同时也导致成骨分化标志物Runx2的蛋白表达下调。结论利用慢病毒介导的干扰病毒载体成功干扰了PDLSCs SMO基因的表达,SMO基因的下调会导致PDLSCs增殖减慢,成骨分化能力减弱。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院口腔科;四川省军区门诊部口腔科;德阳市第二人民医院口腔科;武警重庆总队机关门诊部口腔科;重庆大学生物医学工程学院;
【关键词】： Smoothened RNA干扰 慢病毒 人牙周膜干细胞
【分类号】：R322.41
【正文快照】： 人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stemcells,PDLSCs)是正畸牙移动过程中骨改建过程的关键细胞,如何调控其增殖与分化目前已成为口腔界研究的重点。分泌型信号分子Hedgehog(Hh)家族在哺乳动物多器官的正常发育过程中起关键作用,考虑到现阶段国内外研究中该信号通路

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 常慧君;申涛;董世武;杨彦春;张洁;周继祥;;purmorphamine促进人牙周膜干细胞应力成骨[J];第三军医大学学报;2012年09期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 蹇骞;徐海伟;谢汉平;阴正勤;;RCS大鼠自然病程中视网膜边缘生发区细胞增殖及Shh/Ptc信号途径改变的观察[J];第三军医大学学报;2009年11期

2 刘宁;刘鲁川;董正谋;刘娜;安建平;;复方奥硝唑-甲磺酸培氟沙星缓释制剂对人牙周膜细胞增殖的影响[J];第三军医大学学报;2011年01期

3 申涛;常慧君;简从相;杨彦春;周继祥;;改良法分离培养人牙周膜干细胞[J];华西口腔医学杂志;2011年01期

4 彭庭莉,周继祥,杨军,杨彦春,张从纪;动态张应力对人牙周膜成纤维细胞MMP-9 mRNA合成的影响[J];中华口腔医学杂志;2005年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 申涛;动态张应力促人牙周膜干细胞向成骨细胞分化的研究[D];第三军医大学;2011年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吴丹;王师尧;王佩蓉;金巍娜;;抑制人BI-1基因表达shRNA重组慢病毒表达载体的构建(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年50期

2 贾放;刘长梅;张义正;;RNA干扰技术及其在医学研究中的应用[J];自然科学进展;2005年11期

3 陈扬超,宋超,罗超权;短发夹状RNA在人细胞诱导RNA干扰(英文)[J];癌症;2003年06期

4 孔祥平,LiXing W.Reneker;核糖核酸干扰[J];中国病理生理杂志;2004年05期

5 羊正纲,陈智,徐宁,倪勤,潘修成,金晗英,李敏伟;载体法筛选乙型肝炎病毒S基因小干扰RNA靶位体系的建立[J];中华肝脏病杂志;2004年09期

6 吴丹,吴白燕,梁红业,Nanbert ZHONG;RNA干扰技术在医学遗传学中的应用[J];北京大学学报(医学版);2005年01期

7 吕辉,贺智敏;RNA干扰技术的演进及其在基因功能和基因治疗研究中的应用[J];中南大学学报(医学版);2005年01期

8 黄迪南,姜英华,梁爱玲;siRNA介导的hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞凋亡的影响[J];中国药理学与毒理学杂志;2005年02期

9 许雪青;白云;王丰;王璞;王艳艳;熊加祥;;应用双向启动子RNA干扰技术抑制ICOS表达[J];免疫学杂志;2006年01期

10 陈宁;宋世兵;董子明;张同琳;;人组织因子RNA干扰真核表达载体的构建[J];郑州大学学报(医学版);2006年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 袁磊;吴国豪;张波;;小鼠Atrogin-1基因RNAi对肌肉细胞营养不良的逆转作用[A];中华医学会第十一届全国营养支持学术会议论文汇编[C];2008年

2 张金岭;;慢病毒介导的多干扰技术协同下调CD28和CD25分子抑制淋巴细胞活化的试验研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

3 陈，

本文编号：580020