压力性尿失禁大鼠动物模型的建立及NOS、COX-2、P38的检测

发布时间：2017-07-27 17:07

  本文关键词：压力性尿失禁大鼠动物模型的建立及NOS、COX-2、P38的检测

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【摘要】：1.研究目的1.1建立稳定可靠的压力性尿失禁(SUI)大鼠模型；1.2研究三种一氧化氮合酶(iNOS、nNOS、eNOS)、环氧合酶2(COX-2)、丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)在正常大鼠组(对照组)和SUI大鼠组(注射iNOS抑制剂S-甲基异硫脲SMT及注射生理盐水)阴道、尿道和肛提肌组织中的表达情况；1.3分析五种因子含量在压力性尿失禁模型组和正常对照组中表达含量变化情况,初步探讨SUI动物模型形成的分子机制及五种因子与SUI发生发展关系,为临床发病机制、诊断及治疗提供一定的实验室依据。2.实验方法2.1 将60只雌性已分娩SD大鼠分为三组：A组为正常分娩组(14只),B组为正常分娩+阴道扩张组(22只),C组为正常分娩+阴道扩张+卵巢切除组(24只)；2.2对各组SD大鼠进行喷嚏实验及尿流动力学检测,以证实压力性尿失禁；2.3再次将A组和尿失禁模型成功的B、C组SD大鼠分别随机各均分为2个组：A1、B1、C1组腹腔注射生理盐水,A2、B2、C2组腹腔注射SMT；2.4实验结束后,分别随机提取各亚组SD大鼠(各6只)的阴道、尿道和肛提肌组织,行免疫组化实验分析各亚组SD大鼠阴道、尿道和肛提肌组织中五种因子(iNOS、nNOS、eNOS、COX-2、P38)的表达及分布情况,用统计学方法分析比较SUI模型组和正常组中五种因子表达含量的变化情况。3.实验结果3.1 实验8个月中共6只大鼠死亡,其中B组死亡2只,C组死亡4只。A、B、C三组SD大鼠的腹漏尿点压(ALPP)分别为(64.85±2.44)cmH2O、(45.20±2.78) cmH2O、(44.75±2.33) cmH2O,两两比较A组与B组间差异有统计学意义(P=0.001)、A组与C组间差异均有统计学意义(P=0.001),B组与C组间差异无统计学意义(P=0.578)；A、B、C三组SD大鼠的最大膀胱容量(MBC)分别为(2.82±0.40)ml、(2.77±0.49)ml、(2.78±0.39)ml,三组间差异无统计学意义(P=0.943)；喷嚏实验A组全为阴性,B组有12只大鼠表现为阳性(阳性率为60%),C组有18只大鼠表现为阳性(阳性率为90%)。3.2 iNOS主要表达在三组SD大鼠尿道和阴道粘膜上皮细胞的胞核,肛提肌组织细胞的胞浆。iNOS的染色强度表达积分在三组间比较,差异有统计学意义(P0.05)；注射SMT抑制剂后,iNOS的染色强度表达积分有不同程度下降,组内前后比较,差异有统计学意义(P0.05)。3.3 nNOS主要表达在三组SD大鼠阴道粘膜上皮细胞的胞浆,肛提肌组织细胞的胞核,而在尿道上皮组织中未见明显表达。在阴道和肛提肌组织中,nNOS的染色强度表达积分在三组间比较,差异有统计学意义(P0.05)；注射SMT抑制剂后,nNOS的染色强度表达积分未见明显变化,组内前后比较,差异无统计学意义(P0.05)。3.4 eNOS主要表达在三组SD大鼠肛提肌组织细胞的胞浆,而在尿道、阴道上皮组织中未见明显表达。在肛提肌组织中,eNOS的染色强度表达积分在三组间比较,差异有统计学意义(P0.05)；注射SMT抑制剂后,eNOS的染色强度表达积分未见明显变化,组内前后比较,差异无统计学意义(P0.05)。3.5 COX-2主要表达在三组SD大鼠阴道粘膜上皮细胞的胞浆,肛提肌组织细胞的胞浆,而在尿道粘膜上皮未见明显表达。在阴道和肛提肌组织中,COX-2的染色强度表达积分在三组间比较,差异有统计学意义(P0.05)；注射SMT抑制剂后,COX-2的染色强度表达积分有不同程度下降,组内前后比较,差异有统计学意义(P0.05)。3.6 P38表达在三组SD大鼠尿道、阴道上皮细胞的胞浆和胞核,肛提肌组织细胞的胞浆和胞核。P38的染色强度表达积分在三组间比较,差异无统计学意义(P0.05)；注射SMT抑制剂后,P38的染色强度表达积分未见明显变化,组内前后比较,差异无统计学意义(P0.05)。4.结论4.1妊娠、阴道球囊扩张模拟产伤、切卵巢模拟雌激素水平下降均可成功建立压力性尿失禁动物模型,同时模拟多种病因成功率更高。4.2 iNOS在SUI大鼠模型组尿道、阴道及肛提肌组织中的表达含量均较正常对照组有明显升高；使用SMT抑制剂后,iNOS的表达含量明显下降,提示iNOS参与了SUI的发病,SMT能抑制iNOS的表达。4.3 nNOS在三组SD大鼠的尿道粘膜组织中均未见明显表达,在SUI大鼠模型组阴道、肛提肌组织中的表达含量均较正常对照组有明显升高,提示nNOS参与了SUI的发病；使用SMT抑制剂后,nNOS的表达含量无明显变化,SMT不能抑制nNOS的表达。4.4 eNOS在三组SD大鼠的尿道、阴道粘膜组织中未见明显表达,SUI大鼠模型组肛提肌组织中的表达含量均较正常对照组有明显升高,提示eNOS参与了SUI的发病；使用SMT抑制剂后,eNOS的表达含量无明显变化,SMT不能抑制eNOS的表达。4.5 COX-2在三组SD大鼠的尿道粘膜组织未见明显表达,在SUI大鼠模型组阴道及肛提肌组织中的表达含量均较正常对照组有明显升高,提示COX-2参与了SUI的发病；使用SMT抑制剂后,COX-2的表达含量明显下降,SMT能抑制COX-2的表达。4.6 P38在三组SD大鼠的尿道、阴道及肛提肌组织中的表达含量无明显差异,使用SMT抑制剂后,P38的表达含量明显无明显变化,提示P38与SUI的发病关系不密切,SMT不能抑制P38表达。4.7综上所述,提示三种NOS及COX-2和SUI发病密切相关,而P38与SUI的发病关系不密切。
【关键词】：压力性尿失禁 动物模型 诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 神经型一氧化氮合酶(nNOS) 内皮型一氧化氮合酶(eNOS) 环氧合酶2(COX-2) P38
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R-332;R711.59
【目录】：

• 中英文缩略词5-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 第一部分 压力性尿失禁(SUI)大鼠动物模型的建立15-30
• 引言15-16
• 材料和方法16-19
• 结果19-21
• 讨论21-27
• 结论27
• 参考文献27-30
• 第二部分 SUI大鼠动物模型阴道、尿道、肛提肌组织中相关因子(NOS、COX-2、P38)的检测30-72
• 引言30-33
• 材料和方法33-39
• 结果39-59
• 讨论59-66
• 结论66
• 参考文献66-72
• 综述72-83
• 参考文献80-83
• 论著83-92
• 参考文献90-92
• 文章发表情况92-93
• 致谢93

【参考文献】

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1 蒙艳斌,贺莉萍;雌性大鼠去势方法的改进[J];郴州医学高等专科学校学报;2004年01期

2 石明娟,王龙生,李冬民,吴庚利;实验性大鼠卵巢摘除术操作技巧[J];菏泽医学专科学校学报;2003年03期

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本文编号：582455