抗人CD86单链抗体的基因克

发布时间：2017-07-28 09:24

  本文关键词：抗人CD86单链抗体的基因克隆、表达及结合活性分析

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【摘要】：目的构建并在CHO细胞中表达抗人CD86单链抗体(CD86-scFv),研究该抗体与抗原的结合特性及介导的生物学功能。方法从分泌鼠源CD86抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL基因,构建含有前导肽L-VH-Linker-VL抗体编码基因的表达载体并转染CHO细胞。经筛选高分泌株并扩大培养后收集上清进行纯化。流式细胞术分析CD86-scFv对不同细胞膜型CD86分子的识别及与鼠源亲本抗体1D1的竞争抑制效应。MTT法分析CD86-scFv与Raji细胞表达的CD86结合后对细胞生长的影响。结果获得了稳定表达抗人CD86-scFv的CHO细胞株及相应抗体。CD86-scFv与CD86基因转染细胞株L929-CD86、天然表达CD86分子的人B系淋巴瘤细胞Raji和Daudi细胞的阳性结合率分别为67.0%、72.3%和80.5%。CD86-scFv对鼠源亲本抗体1D1具有竞争结合能力,将CD86-scFv(终浓度20μg/mL)加入Raji细胞共同培养72 h时的细胞生长抑制率为28.3%。结论成功构建了稳定分泌抗人CD86-scFv的CHO细胞株(命名为SA-IV)。该抗体能够识别CD86分子并具有良好的生物学活性。
【作者单位】： 苏州大学医学部免疫学系;
【关键词】： CD 单链抗体 真核表达
【基金】：科技部科技重大专项(2009ZX09103-705) 苏州市科技计划项目(SYS201104)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： CD86(又称B7-2)是表达在抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC)表面的重要共刺激分子。其受体是表达在T细胞表面的CD28分子。CD86与CD28结合转导的信号,对T细胞的活化、增殖与效应发挥重要作用[1-2]。由于CD86分子表达的时相早且丰度高,故被认为是在免疫反应初期决定T细

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本文编号：583374