小鼠CD40分子胞外段基因的克

发布时间：2017-07-31 17:19

  本文关键词：小鼠CD40分子胞外段基因的克隆、原核表达及活性鉴定

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【摘要】：目的构建含小鼠CD40(mCD40)分子胞外段序列的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对mCD40/GST融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定。方法从小鼠DC2.4细胞系中扩增目的基因mCD40并克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-6P-1-mCD40,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达mCD40/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其抗原活性。结果 PCR扩增产物经测序分析与GenBank公布的小鼠CD40胞外段序列一致;重组表达载体经酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析证实得到了相对分子质量(M r)为45 000的重组蛋白;Western blot法和ELISA检测证实纯化的mCD40/GST蛋白能够与特异性抗体发生反应。结论成功构建了原核表达载体pGEX-6P-1-mCD40,利用原核表达系统实现了mCD40/GST融合蛋白的可溶性表达并证明其具有较高的抗原活性。
【作者单位】： 解放军总医院泌尿外科;军事医学科学院基础医学研究所;新疆大学生命科学与技术学院;
【关键词】： CD 原核表达 蛋白纯化 活性检测
【基金】：国家自然科学基金(30840094) 国家高技术研究发展计划(863)(2007AA02Z451)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： CD40是一个相对分子质量(Mr)48 000的跨膜糖蛋白细胞表面受体,属于肿瘤坏死因子(tumor necrosisfactor,TNF)受体超家族成员。最初被发现于B淋巴细胞,并证明可以诱导B细胞分化增殖[1-2],随后研究证实CD40同时也表达于单核细胞、树突状细胞(dendritic cells,DC)以及其他一些非造

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【共引文献】

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【相似文献】

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本文编号：600249