携带IP-10基因双歧杆菌载体的构建及鉴定

发布时间：2017-08-01 07:20

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【摘要】：目的构建并鉴定携带人γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)基因的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭分泌型表达载体,探索抗肿瘤基因治疗的新型载体。方法用改良型MRS双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离长双歧杆菌,通过PCR方法克隆双歧杆菌的内源性阿拉伯糖苷酶的启动子和分泌性信号肽DNA序列(ara)。然后以大肠杆菌质粒pBAD-A和pBS-T为基础,以ara启动子取代原有的启动子,以绿色荧光蛋白基因(GFP)作为报告基因,构建大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒pBS-BPP-ara-GFP。通过PCR方法扩增真核表达载体pBLAST49-hIP-10质粒中的IP-10基因,将其克隆到穿梭质粒pBS-BPP-ara-GFP中,采用电转化法将正确克隆的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒导入双歧杆菌中,并以L-arabinose诱导表达。在激光共聚焦显微镜下观察转基因双歧杆菌中GFP蛋白的表达;运用免疫蛋白质印迹(Western blot)检测转基因双歧杆菌中IP-10的蛋白表达水平。结果含GFP基因的转基因双歧杆菌在激光共聚焦显微镜下观察到绿色荧光。含IP-10基因的转基因双歧杆菌经Western blot检测到分子量为8.47 kD的目的蛋白条带。结论成功构建能表达IP-10蛋白的穿梭质粒载体pBS-BPP-ara-GFP-IP-10,为IP-10转基因双歧杆菌的抗肿瘤机制及其抑瘤效应的研究奠定基础。
【作者单位】： 暨南大学第二临床医学院;广东省深圳市人民医院消化内科;广东省深圳市儿童医院消化内科;
【关键词】： 长双歧杆菌 绿色荧光蛋白基因 γ干扰素诱导蛋白
【基金】：广东省深圳市医疗卫生系统科技计划重点项目(编号:深科信[2005]209号-4)
【分类号】：R371
【正文快照】： 双歧杆菌是人体内的正常生理性细菌,属专项厌氧菌,定殖于肠道内,是肠道的优势菌和有益菌。它不仅具有改善肠道微生态环境,促进营养吸收的作用,而且还有调节免疫功能、分解有毒的代谢中间产物和防治肿瘤的作用[1-2]。研究发现,低氧区的存在是实体瘤的一个特性,而厌氧菌具有趋

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1 王泽宙,邱全胜;绿色荧光蛋白基因mgfp4在水稻愈伤组织中的瞬时表达[J];北京师范大学学报(自然科学版);2000年03期

2 裴子飞，，杜全胜，齐义鹏，朱应;突变型绿色荧光蛋白基因在昆虫细胞和幼虫中的表达[J];武汉大学学报(自然科学版);1999年02期

3 彭莹;张晓梅;雷雪明;程轶U

本文编号：603066