增殖的组织细胞中糖代谢增强

发布时间：2017-08-01 07:22

  本文关键词：增殖的组织细胞中糖代谢增强

  更多相关文章： 糖代谢 关键酶 细胞增殖 新生内膜 大肠癌

【摘要】：目的:糖代谢是生物体内普遍存在的能量代谢过程。在血管损伤和恶性肿瘤组织中的糖代谢活跃,以满足细胞增殖的需要。目前,有关糖代谢异常与增殖性疾病的关系仍尚未完全清晰。本文通过观察小鼠颈总动脉内皮损伤模型、恶性肿瘤及肿瘤细胞系中糖代谢途径关键酶的活性变化,探讨糖代谢与细胞增殖的关系,为理解增殖细胞的糖代谢规律提供实验依据。方法:1随机选取C57BL/6小鼠,雄性,8~12周,13只。异氟烷吸入式麻醉,行单侧颈总动脉结扎,设为血管损伤组;对侧颈总动脉不作处理设为假手术组。血管损伤组和假手术组分别于结扎术后14天,心脏灌流后取小鼠颈总动脉并将血管分为两部分,一部分匀浆,提取组织蛋白,分别用Western blot方法和己糖激酶活性测定试剂盒检测血管壁中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)的表达和己糖激酶(hexokinase,HK)活性;另一部分取材后,进行脱水、石蜡包埋、切片、免疫组织化学染色法检测糖酵解途径中最后一个关键酶丙酮酸激酶-2(pyruvate kinase-2,PKM2)的表达。2收集2014年7月-2015年11月期间河北医科大学第四医院外二科结直肠癌的标本30例,以结直肠癌组织标本为实验组,距肿瘤10 cm以外的正常肠粘膜组织为对照组。标本分为两份,一份放入-80℃冰箱中冻存,随后用Western blot方法检测标本中G6PD、PKM2的表达,用己糖激酶活性测定试剂盒检测HK活性;另一份放入4%的多聚甲醛组织固定液中固定,随后进行脱水、石蜡包埋、切片及免疫组化染色检测G6PD及PKM2的表达。3无菌环境下培养人结肠癌肿瘤细胞系HCT116细胞和人正常结肠粘膜上皮细胞系FHC细胞,用Western blot方法检测两种细胞中G6PD和PKM2的表达,用己糖激酶活性测定试剂盒检测HK活性。结果:1 G6PD、PKM2和HK在血管新生内膜中的表达C57BL/6小鼠颈总动脉结扎损伤后第14天,Western blot结果显示,损伤侧G6PD的表达明显高于对照侧(P0.05);并且HK活性变化趋势与G6PD相似,损伤侧HK的活性明显高于对照(P0.05);免疫组织化学结果显示,损伤侧PKM2的阳性颗粒数明显升高(P0.05)。2 G6PD、PKM2和HK在肿瘤组织中的表达Western blot结果显示,30例患者肿瘤组织中G6PD和PKM2的表达水平高于癌旁正常组织(P0.05)。肿瘤组织中HK活性水平高于癌旁正常组织(P0.05);免疫组织化学结果显示,肿瘤组织中G6PD和PKM2的阳性颗粒数高于癌旁正常组织(P0.05)。3 G6PD、PKM2和HK在肿瘤细胞中的表达Western blot结果显示,人结肠癌肿瘤细胞系HCT116细胞中G6PD和PKM2的表达水平高于人正常结肠粘膜上皮细胞系FHC细胞(P0.05);HK活性测定结果显示,人结肠癌肿瘤细胞系HCT116细胞中HK活性水平高于人正常结肠粘膜上皮细胞系FHC细胞(P0.05)。结论:1在血管新生内膜和肿瘤组织细胞中糖代谢关键酶G6PD、PKM2和HK的表达和活性升高。2在增殖的细胞中其糖代谢速率加快。
【关键词】：糖代谢 关键酶 细胞增殖 新生内膜 大肠癌
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-9
• 材料与方法9-17
• 结果17-18
• 附图18-29
• 附表29-30
• 讨论30-33
• 结论33-34
• 参考文献34-38
• 综述 糖酵解酶在非代谢功能中与癌症细胞增殖的关系..38-55
• 参考文献47-55
• 致谢55-56
• 个人简历56

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本文编号：603075