志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备

发布时间：2017-08-05 17:33

  本文关键词：志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备

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【摘要】：目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价。方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达并纯化Apyrase-HIS融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多抗。Western blot、ELISA、免疫荧光鉴定获得的抗血清。结果:成功构建了原核表达载体pET24a-Apyrase,经诱导表达出相对分子量为28 kD的融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备的多克隆抗体,通过Western blot、ELISA、免疫荧光法证明多克隆抗体制备成功。结论:成功制备了志贺菌福氏5a特异性的鼠多克隆抗体,为进一步研究Apyrase蛋白在志贺菌福氏5a M90T中的表达、定位及志贺菌福氏5a M90T的快速检测奠定了基础。
【作者单位】： 内蒙古农业大学兽医学院;军事医学科学研究院生物工程研究所;
【关键词】： 志贺菌福氏a MT Apyrase 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(30970122)资助项目
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 志贺菌俗称痢疾杆菌,定植于人类小肠上皮细胞内,是细菌性痢疾最常见的病原菌之一,据报道, 每年全球约有1.6亿人感染痢疾,其中99%发生在卫生条件较差的发展中国家[1-3]。在志贺菌福氏5a中,Apyrase是一个ATP二磷酸水解酶,由毒力大质粒编码,有文献表明它是毒力蛋白IcsA发挥功能

【参考文献】

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1 龚益熊;廖翔;朱力;吴兰;周晓巍;梁龙;黄培堂;;双向BN/SDS-PAGE分离鉴定痢疾杆菌福氏5型M90T株毒力相关膜蛋白复合物[J];生物技术通报;2011年09期

【共引文献】

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2 王羽;周围;廖翔;魏波;冉金宝;高原;呼和巴特尔;岳俊杰;梁龙;;弗氏志贺菌5a型M90T株ClpB蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化[J];生物技术通讯;2012年06期

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1 冉金宝;福氏志贺氏菌M90T毒力相关膜蛋白复合物组成蛋白基因缺失突变体的构建[D];内蒙古农业大学;2012年

【相似文献】

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3 陈波;钱，

本文编号：626113