产气荚膜梭菌α毒素突变体构建及其卵黄抗体制备

发布时间：2017-08-06 10:20

  本文关键词：产气荚膜梭菌α毒素突变体构建及其卵黄抗体制备

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【摘要】：目的制备特异性的产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin,CPA)卵黄抗体(yolk immunoglobulin,IgY)。方法利用定点突变技术,将CPA第56位天冬氨酸和第68位组氨酸分别突变为丝氨酸,构建了重组表达载体pTIG-mCPAD56S和pTIG-mCPAH68S,将其转化入E.coli Origami中进行诱导表达。用亲和层析的方法对突变体蛋白进行纯化并对其活性及抗原性进行检测,将获得的突变体蛋白分别免疫健康母鸡,收集鸡蛋;经水稀释法纯化卵黄中IgY;用酶联免疫吸附试验检测IgY效价;通过筛选保护剂而选择最佳的IgY冻干条件。结果与结论pTIG-mCPA在Origami表达菌株中得到高效表达,经验证,mCPAD56S和mCPAH68S均完全失去生物学活性同时保留抗原性;纯化卵黄后得到较高纯度的特异性IgY,其效价可达到1∶200 000;经过IgY冻干条件的筛选,最终选择不添加保护剂大量冻干IgY作为抗体的储备。该研究为研制基于IgY抗体的检测方法奠定了基础。
【作者单位】： 安徽医科大学研究生院;军事医学科学院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全国家重点实验室;
【关键词】： 产气荚膜梭菌α毒素 突变 IgY 重组表达
【基金】：全军医学科技“十二五”重大专项资助项目(AWS11C001)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens typeA)可引起人畜创伤性气性坏疽和动物坏死性肠炎等疾病,其中该菌产生的α毒素(CPA)是最主要的致病因子。α毒素为相对分子质量43×103的单链多肽,是一种Zn2+依赖性多功能金属酶,其N端具有磷脂酶C(phospholipase C,PLC)活性,C端具

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