霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的建立

发布时间：2017-08-06 12:21

  本文关键词：霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的建立

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【摘要】：目的制备霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)、建立双抗体夹心ELISA并初步应用于食品检测。方法采用差速离心法提取霍乱弧菌Vc75菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水,纯化后得到抗体。结果获得6株持续、稳定分泌抗霍乱弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VcNo.1~VcNo.6,抗体效价高达1∶2×106。SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(M r)为44 000并且纯度较高。采用VcNo.6抗体建立了霍乱弧菌双抗体夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,通过采用100株霍乱弧菌和101株非霍乱弧菌进行特异性实验,100株霍乱弧菌呈阳性反应,101株非霍乱弧菌呈阴性反应,结果表明VcNo.6抗体具有良好的特异性。在基质添加试验中,最低检出限为1 CFU/g样品。结论成功制备了霍乱弧菌鞭毛蛋白mAb,并将其应用于双抗体夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,与所测试的非霍乱弧菌没有交叉反应。
【作者单位】： 北京出入境检验检疫局;北京农学院;河北出入境检验检疫局;北京大学;
【关键词】： 霍乱弧菌 鞭毛蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
【基金】：科技部公益性行业科研专项(201110034)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 霍乱弧菌(Vibrio cholerae,Vc)是引起霍乱的病原菌,在世界上曾引起多次爆发流行,给人们的生命财产造成巨大的损失[1]。霍乱是全球的一大威胁,是烈性传染病之一[2]。自然情况下,人类是霍乱弧菌的唯一易感者,主要通过被病原菌污染的水源或食物经口传染,临床表现为剧烈的呕吐、腹

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本文编号：629830