Robo1基因miR-218靶位点序列克隆及其突变体构建

发布时间：2017-08-08 05:00

  本文关键词：Robo1基因miR-218靶位点序列克隆及其突变体构建

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【摘要】：目的克隆Robo1基因3'UTR的miR-218靶位点区域序列并构建"seed"区位点突变体,以便进一步研究miR-218对Robo1基因的调控作用。方法通过targetscan 6.2对Robo1 3'UTR进行分析找出miR-218靶位点,根据NCBI GenBank中Robo1 mRNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从人类细胞总RNA中对包含miR-218靶位点的序列进行克隆;并设计一对突变引物,通过重叠PCR法获得"seed"区点突变基因序列;通过双荧光报告基因检测miR-218对Robo1基因的调控。结果经测序验证,成功克隆了目的基因序列,并成功构建了"seed"区点突变体,并且通过报告基因检测发现miR-218对Robo1表达有显著抑制(P0.05)。结论成功克隆了含有miR-218靶位点的Robo1 3'UTR基因序列及构建了"seed"区点突变体,并阐明miR-218直接作用于Robo1基因3'UTR区,为进一步研究miR-218对Robo1基因的转录后调控机制奠定了基础。
【作者单位】： 广东药学院血管生物学研究所;
【关键词】： Robo miR- 靶位点 突变体
【基金】：国家自然科学基金(31200896) 广东省自然科学基金(S2012040007658) 广东省医学科研基金(B2012181)
【分类号】：R346
【正文快照】： Robo(Roundabout)家族包括4个成员(Robo1,2,3和4),是一类保守的跨膜蛋白家族,在神经系统的发育中发挥重要调控作用〔1〕。Robo1主要表达于神经系统,对神经轴突延伸和神经细胞迁移有重要调控作用。研究发现,Robo1作为癌基因和抑癌基因在不同的肿瘤中发挥调控作用。作为癌基因,R

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本文编号：638265